creloxp基因敲除系统解读经典课件.ppt

文档介绍：cre_loxp基因敲除系统解读背景介绍1981年Evans等首次在体外分离和培养ES,成功建立了小鼠胚胎干细胞系1985年Smithies最早在哺乳动物细胞中发现并实现了同源重组一、Cre/Loxp系统Cre重组酶(37℃)位点特异性重组酶,介导loxp位点间的序列同源重组70%重组率,无需辅助因子,多种结构的DNA底物Loxpsite34bp反向重复序列Flp/Frt重组系统P1噬菌体(1)重组方式(2)基因敲除机理Offspring:50%heterozygousknockoutafter1generation基因敲除机理(续)Offspring:25%homozygousknockoutafter2generation二、基因敲除的基本流程(1)打靶载体构建ConditionalKnockoutExon13NGT/AGAttention:(2)转化ES细胞电穿孔或是显微注射方法将构建好的打靶载体导入ES细胞电转需要的细胞数量2-5x107