文档介绍：实验日期:2009年10月11日叶绿体色素的提取分离和理化性质A提取与分离实验原理叶绿体中的叶绿素a、叶绿素b、胡萝卜素和叶黄素不溶于水,但可溶于有机溶剂,故可用乙醇等有机溶剂提取。提取液可用薄层层析色谱法加以分离和鉴别。薄层层析色谱法是将吸附剂均匀涂在玻璃板上成一薄层。把待分离的样品溶液点在薄层板的下端并把薄层板下端浸入展开剂中后,展开剂通过毛细管作用由下而上逐渐浸润薄层板,并带动样品在板上也向上移动,样品在吸附剂和展开剂之间不断地吸附脱附。由于吸附剂对样品中不同成分的吸附能力不同,从而使各成分有不同的移动速度而彼此分离。二、%的乙醇,碳酸钙粉末,展开剂(石油醚:丙酮:苯=7:5:1,体积比),研钵,漏斗,三角瓶,剪刀,点样毛细管,层析缸,硅胶预制板,滤纸三、~15m95%乙醇研磨至糊状向研钵中加入少量CaCO3粉末,2~3ml95%乙醇放入研钵去掉中脉并剪碎擦干洗净新鲜的菠菜叶片4~5片(2g左右)叶绿体色素提取液用漏斗过滤残渣用10ml95%(1).取硅胶预制板一个,用点样毛细管吸取上述提取液,平行于硅胶板的短边,距下边缘1cm处用毛细管划线,风干后再划第二次,重复操作3~4次(2).在干洁的层析缸中加入适量的展开剂,,将硅胶预制板带有色素的一端放入,使其下端浸入展开剂中(勿使待测样品浸入展开剂中)。迅速盖好层析缸盖。(3).观察。当看到各种色素得到较好分离,展开剂前沿接近硅胶预制板上端近边缘处时,取出硅胶预制板,并迅速用铅笔标出展开剂前沿和各色素带的位置。四、实验结果经过薄层色谱分离后,叶绿素a为蓝绿色,叶绿素b为黄绿色、胡萝卜素为橙黄色和叶黄素为鲜黄色。各色素条带在薄层中的位置可用相对比移值Rf来表示,即Rf=斑点中心到原点的距离/溶剂前沿至原点的距离名称上升高度/-、实验原理叶绿素是一种由叶绿酸与甲醇和叶绿醇形成的复杂酯,故可与碱起皂化反应而生成甲醇和叶绿醇及叶绿酸盐,产生的盐能溶于水中,可用此法将叶绿素与类胡萝卜素分离。叶绿素吸收光量子而转变成激发态,激发态的叶绿素分子很不稳定,当它变回基态时可发射出红光量子,因而产生荧光。叶绿素中的镁可以被H+所取代而成褐色的去镁叶绿素。去镁叶绿素遇铜则成为很稳定的铜代叶绿素,其在光下不易被破坏。实验材料与试剂新鲜菠菜叶片、叶绿体色素乙醇提取液刻度试管,小试管若干,试管架,水浴锅,10ml移液管,锡箔纸体积分数为95%的乙醇,苯,醋酸铜粉末,质量分数为5%的稀盐酸,醋酸-醋酸铜溶液,氢氧化钾-甲醇溶液实验步骤荧光现象的观察取一支小试管加入3ml浓的叶绿体色素乙醇提取液将试管在直射光下照射,比较溶液的透射光与反射光的颜色不同皂化作用(绿色素与黄色素的分离)取一支小试管加入3ml浓的叶绿体色素乙醇提取液向试管内加入1ml氢氧化钾-甲醇溶液并充分摇匀片刻后加入3ml苯并摇匀再沿试管壁慢慢加入1ml左右蒸馏水并轻轻混匀然后将试管置于试管架上静置分层(若不分层,则用滴管吸取蒸馏水沿管壁滴加,边滴边摇直到分层时静置)观察H+和Cu2+对