文档介绍：实验四细菌的染色和细菌细胞构造的观察细菌的染色和细菌细胞构造的观察?目的要求?染色剂和染色的原理?实验材料?实验程序?思考题目的要求?学****微生物涂片?掌握细菌的一般染色发和革兰氏染色?进一步熟练掌握显微镜油镜的使用技术?观察和识别细菌细胞的特殊构造染色剂和染色原理Ⅰ?微生物染色的基本原理,是借助物理和化学因素的作用而进行的。物理因素如:细胞及细胞物质对染料的毛细现象、渗透、吸附作用等。化学因素如:正负离子之间的相互吸引等?染色剂染料按其电离后所带电荷的性质可分为以下类型:1. 酸性染料:如酸性复红、刚果红、伊红、藻红、苯***黑等。2. 碱性染料:一般有碱性复红、中性红、孔雀绿、番红、结晶紫、美兰、***紫等,细菌易被碱性染料染色。3. 中性(复合)染料:如伊红、美兰等,Wright染料和Gimsa染料等(常用于细胞核染色)。4. 单纯染色:这类染料的化学亲和力低,大多是偶氮化合物,不溶于水,但溶于脂肪溶剂中,如苏丹类(Sudan b)的染料。染色剂和染色原理Ⅱ微生物染色常用染料如下表:实验材料?(Escherichia coli) 24h的斜面培养物。 (Bacillus subtilis) 12—16h的斜面培养物。?载玻片、接种环、镊子、酒精灯、各种染色液、火柴、无菌牙签、玻璃铅笔、蒸馏水。?显微镜、镜头油、擦镜纸、吸水纸、二甲苯等。?(Bacillus thuringiensis)的芽孢;(Bacillus mucillaginosus)的荚膜;。实验程序Ⅰ(细菌染色的方法和步骤)?细菌染色的方法:?:用一种染色液染菌体后,就可以观察微生物的大小、形状、和细胞排列状况,但不能鉴别微生物以及它的特殊构造等。 :用两种或两种以上染色液进行染色,有协助鉴别微生物的作用,故也称鉴别染色法。常用的有:革兰氏染色法、抗酸染色法、芽孢染色法、芽孢染色法、鞭毛染色法、细胞染色法等。?染色技术的一般过程涂片 干燥 固定 染色 媒染 脱色 复染 水洗 干燥 镜检实验程序Ⅱ(简单染色的方法和步骤)?简单染色法(一般染色法)::自然气干或酒精灯高处微微加热。:在整个涂面上滴加齐氏石炭酸复红,染色1分钟。:倾去染液,用自来水细流冲洗至流下的水中无染料颜色为止。7干燥:空气中自然干燥。8镜检:在油镜下观察牙垢中的各种细菌形态并绘图。实验程序Ⅲ(革兰氏染色的方法和步骤)?革兰氏(Gram)染色法1. 涂片2. 初染:在做好的涂面上滴加草酸铵结晶紫染液,染1分钟,倾去染液,流水冲洗至无紫色。3. 媒染:先用新配的路哥氏碘液冲去残水,而后用其覆盖涂面1分钟,后水洗。4. 脱色:除去残水后,滴加95%酒精进行脱色约30秒,后立即用流水冲洗。5. 复染:滴加番红染色液,染1分钟,水洗后用吸水纸吸干。:观察染色结果并绘图。革革兰兰氏氏染染色色法法?—结晶结晶紫染液第紫染液第一次一次染色1min