文档介绍：—1JournalofAnalysisI"2∞mtory高聚物型色谱柱分离乙酰半胱氨酸及其有关物质方硕,魏荣卿,刘晓宁擎,尹亚萍(南京工业大学生物与制药工程学院色谱中心,南京210009)摘要:考察高聚物型色谱柱(聚苯乙烯一二乙烯基苯()麦科菲反相高效液相色谱柱,-姗)分离乙酰半胱氨酸以及有关物质的适用性。采用MKF-PtP-MH色谱柱(×250mln,5/an),y(()):y(乙***)=9:l为流动相,流速为lmL/min,检测波长210nIn,柱温为25℃。;乙酰半胱氨酸质量浓度在ll~111n—L的范围内,具有良好的线性关系,回归方程为A=+,r=(rt,=8);乙酰半胱氨酸的定量限为llnag/L;;进样精密度RSD=%(rt=6)。关键词:高聚物型色谱柱;;MKF-RP-MH;乙酰半胱氨酸;有关物质中图分类号::A文章编号:1000-0720(2010)01-也-5-04乙酰半胱氨酸为合成谷胱甘肽的必需氨基酸,是一种含有巯基的抗氧化剂,具有抗氧化、抗炎,保护肝脏、肺、心脏和神经细胞等作用,用于治疗急性、慢性支气管炎以及其他原因引起的粘痰合并发生的肺部疾病【l’2】。乙酰半胱氨酸还可用于HⅣ病毒感染者的治疗,改善由于病毒引起的半胱氨酸缺乏患者的生理和免疫功能[3J。外《中国国家药品标准)(2007年1月1号实施)¨】,标准号为:WSl.(x一261)-)的方法与《英国药典)2003版所述方法基本一致;《欧洲药典》52版旧。使用ODS柱,利用离子抑制色谱法对乙酰半胱氨酸及其有关物质进行分析,该方法所用流动相体系较为简单,但该分析方法流动相中有机相比例偏低(仅为3%),低于普通ODS柱承受下限(最低有机相比例为5%),并且流动相pH也较低,长期使用对色谱柱的寿命有影响。因此开发一种更为适宜的检测方法对于乙酰半胱氨酸及其相关物质的检测具有实际意义。(图1)在生产过程中容易引人L胱氨酸、L广半胱氨酸、N,N’.二乙酰胱氨酸和N,S---"乙酰胱氨酸等有关物质。目前各国药典对乙酰半胱氨酸的杂质均有严格的规定,其中《中国药典)2005版采用碘量法对乙酰半胱氨酸进行含量测定,但未对有关物质进行规定【41;《美国药典)28版使用I-IPLC及ODS柱,以苯丙氨酸为内标物,对乙酰半胱氨酸的含量进行测定,也未对有关物质进行规定b1;《英国药典》2003版使用ODS柱【6】,利用离子对色谱法对乙酰半胱氨酸及其有关物质进行分离,分离效果较好,但流动相使用的离子对试剂(庚烷磺酸钠)较为昂贵,检测成本高,并且流动相pH较低,也会影响色谱柱使用寿命;另、、//COOHHs/图1乙酰半胱氨酸结构式№.1Chemicalstructurefortmda0f跚哟m筘晒啦本实验拟采用耐酸能力强并耐低有机相的高聚物型苯乙烯一二乙烯基苯为固定相,参照《欧洲收稿日期:2009-;修订日期:2009-:“863”项目(2007AA022200)和“十一五”国家科技支撑计划(2006BAK03A06)项目资助作者简介:方硕(1983一),男,硕士;E-mail:******@、xiaonin出******@——1JournalofArmlysisIaboratory药典)52版的流动相条件对乙酰半胱氨酸及其有关物质进行分离。(美国戴安公司),由P680HPLC泵、、TCC2100柱温箱、8125型进样装置组成;工作站(美国戴安Chromeleon系统)。乙酰半胱氨酸对照品(上海第一生化药业公司),L广胱氨酸(上海惠兴生化试剂公司),L广半胱氨酸(上海惠兴生化试剂公司),N,N’一二乙酰胱氨麦科菲高效分离载体公司,型号:MKF-RP-MH,250mm×)。流动相:***,流速:lmL/min,进样量:20止,柱温:25℃,。乙酰半胱氨酸在MKF-RP—MH色谱柱中的色谱行为所测乙酰半胱氨酸以及杂质均为弱酸性物质,因此参考《欧洲药典》52版的方法,选取3个不同pH的磷酸盐缓冲液,并改变乙***的比例,考察乙酰半胱氨酸及其杂质的分离