文档介绍：第九讲基因操作的工具酶第二章基因操作的工具酶**基因工程工具酶的概念一限制性核酸内切酶*二DNA连接酶三DNA聚合酶*四DNA和RNA修饰酶五内容*,依赖于一些重要的酶,如限制性核酸内切酶、连接酶等,作为工具对DNA进行切割和拼接,这些酶统称为基因工程工具酶*基因工程必需的两个工具酶“分子剪刀”⒈限制性核酸内切酶——在DNA上核苷酸的特定连接处以特定的方式把DNA双链切开。如EcoRI,HpaI“分子胶”⒉DNA连接酶——促使具有互补粘性末端或平头末端的载体和供体DN***段连接,形成重组DNA分子一、工具酶概念*限制性内切酶与DNA连接酶细菌细胞内特异性降解外源核酸分子的核酸酶,其作用特点是:特异性降解异源DNA分子(***化修饰差异)I类限制酶随机切割双链DNA分子,II类限制酶识别、切割特殊的回文(对称)序列来源不同、具有相同粘性末端DN***段在DNA连接酶的作用下可准确连接形成重组DNA分子通常使用来自T4噬菌体DNA连接酶一、工具酶概念*核酸核酸水解酶类核酸合成酶类核酸修饰酶类核酸内切酶核酸外切酶DNA聚合酶RNA聚合酶DNA连接酶***化酶核苷酸激酶核苷酸转移酶磷酸酶一、工具酶概念*常用的工具酶工具酶类功能限制性核酸内切酶特异性识别和切割DNAT4DNA连接酶生成3′-5′磷酸二酯键DNA聚合酶Ⅰ(Klenow片段)探针标记、补平3′末端反转录酶cDNA合成多聚核苷酸激酶5′磷酸化、探针标记末端脱氧核苷酰转移酶3′末端多聚尾碱性磷酸酶切除末端磷酸基TaqDNA聚合酶DNA合成、PCR一、工具酶概念*—修饰系统分类命名特性影响内切酶酶切反应的条件*5’5’*5’5’