文档介绍：实验4转基因植物PCR检测四、转基因植物PCR基因扩增及电泳检测一、。。二、原理PCR检测技术的基本原理是根据食品中待检的外源基因核酸序列设计合适引物,经PCR反应使待检靶标DNA序列得以扩增放大,最后经凝胶电泳分析靶标PCR产物的有无,从而对食品中是否含有靶标转基因序列成分进行判定。由于目前商品化的绝大多数转基因食品普遍含有CaMV35S启动子和NOS终止子这两种基因表达调控序列或其中之一,而CaMV35S启动子和NOS终止子的DNA序列早已公开。故在对食品样品的转基因背景一无所知的情况下,根据CaMV35S启动子和NOS终止子的DNA序列设计合适引物,通过PCR反应检测食品中是否含有CaMV35S启动子和NOS终止子基因序列,来判定该食品是否为转基因食品。 三、试验材料提取的甘薯基因组DNA。四、:5,-ATCA-3,//5,-GATAGTGGGATTGTGCGTCA-3,;NOS:5,-GGTCTTC-3,//5,-TAGTTTGCGCGC-3,。:无菌去离子水;模板DNA;20μmol/LPCR引物;5U/μLTaqDNA聚合酶;;10×PCR缓冲液;25mmol/LMgCl2,25mmol/LKCl,20μg/(见实验6)五、。。。。。。。六、:×//    具体操作:(每一个样品分设35S和NOS两个检测反应)并加空白对照、阴性对照、阳性对照,取一定数量的无菌无污染的洁净干燥PCR管,按下表用记号笔在管壁上编号:管号0P-1P-2NT-1NT-21-11-2样品空白对照阳性对照1阳性对照2阴性对照1阴性对照2待检样品1待检样品1引物35S35SNOS35SNOS35SNOS模板无菌水质粒pBI121质粒pBI121非转基因样品非转基因样品转基因样品1转基因样品1        。因各反应管仅引物和模板不同,为了取液方便,,后用移液器分装至各管,再分别添加引物和模板。,将反应管放入微型离心机稍离心(如5000r/min离心5-10s)混匀。。