文档介绍：蛋白酶活力测定法ZBX66030-87中华人民共和国专业标准中华人民共和国专业标准蛋白酶活力测定法ZBX66030-87Measurementofproteinaseactivity━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━本方法适用于酿造酱油时在制品菌种、成曲的蛋白酶活力测定。:(Folin试剂):于2000mL磨口回流装置内,加入钨酸钠(Na2WO4·2H2O)100g,钼酸钠(Na2MoO4·2H2O)25g,蒸馏水700mL,85%磷酸50mL,浓盐酸100mL,文火回流10h。取去冷凝器,加入硫酸锂(Li2SO4)50g,蒸馏水50mL,混匀,加入几滴液体溴,再煮沸15min,以驱逐残溴及除去颜色,溶液应呈黄色而非绿色。若溶液仍有绿色,需要再加几滴溴液,再煮沸除去之。冷却后,定容至1000mL,用细菌漏斗(No4~5)过滤,置于棕色瓶中保存。此溶液使用时加2倍蒸馏水稀释。即成已稀释的福林试剂。:称取无水碳酸钠(Na2CO3),定容至1000mL。***乙酸(TCA)溶液:L3COOH),定容至1000mL。:称取磷酸二氢钠(NaH2PO4·2H2O),定容至1000mL,(A液)。称取磷酸氢二钠(Na2HPO4·12H2O),定容至1000mL,(B液)。取A液28mL和B液72mL,再用蒸馏水稀释1倍,。%酪蛋白溶液:准确称取干酪素2g,,,在水浴中加热使溶解(必要时用小火加热煮沸),。配制后应及时使用或放入冰箱内保存,否则极易繁殖细菌,引起变质。:精确称取在105℃,逐步加入6mL1N盐酸使溶解,,其浓度为1000μg/mL,再吸取此液10mL,,即配成100μg/mL的酪氨酸溶液。此溶液配成后也应及时使用或放入冰箱内保存,以免繁殖细菌而变质。:;-G型光电比色计或72型分光光度计;;、2、5、10mL移液管等。(表1)。表1配制各种不同浓度的酪氨酸溶液━━━━━━━━━━━┳━━━━━━━━━━━━━━━━━━┃管号 试剂┣━━┳━━┳━━┳━━┳━━┳━━━┃1┃2┃3┃4┃5┃6 ━━━━━━━━━━━╋━━╋━━╋━━╋━━╋━━╋━━━蒸馏水,mL┃10┃8┃6┃4┃2┃0100μg/mL酪氨酸,mL┃0┃2┃4┃6┃8┃10酪氨酸最终浓度,μg/ml┃0┃20┃40┃60┃80┃100━━━━━━━━━━━┻━━┻━━┻━━┻━━┻━━┻━━━:取6支试管编号按表1分别吸取不同浓度酪氨酸1mL,,再各加入已稀释的福林试剂1mL。摇匀置于水浴锅中。40℃保温发色20min在581-G型光电比色计上分别测定光密度(OD)(滤色片用65**#)或用72型分光光度计进行测定(波长660nm)。一般测三次,取平均值。将1~6号管所测得的光密度(OD)减去1号管(蒸馏水空白试验)所测得的光密度为净OD数。为了清楚起见。再列出表格如下(表2)。表2━━━━━━━━━━━━━━━┳━━━━━━━━━━━━━━━━━━┃管号试剂┣━━┳━━┳━━┳━━┳━━┳━━━ ┃1┃2┃3┃4┃5┃6 ━━━━━━━━━━━━━━━╋━━╋━━╋━━╋━━╋━━╋━━━按表1制备的不同浓度酪氨酸,mL┃1┃1┃1┃1┃1┃1 ━━━━━━━━━━━━━━━╋━━╋━━╋━━╋━━╋━━╋━━━,mL┃5┃5┃5┃5┃5┃5━━━━━━━━━━━━━━━╋━━╋━━╋━━╋━━╋━━╋━━━福林试剂,mL┃1┃1┃1┃1┃1┃1━━━━━━━━━━┳━━━━╋━━╋━━╋━━╋━━╋━━╋━━━┃1┃┃┃┃┃┃┣━━━━╋━━╋━━╋━━╋━━╋━━╋━━━┃2┃┃┃┃┃┃OD值┣━━━━╋━━╋━━╋━━╋━━╋━━╋━━━┃3┃┃┃┃┃┃┣━━━━╋━━╋━━╋━━╋━━╋━━╋━━━┃平均┃┃┃┃┃┃━━━━━━━━━━┻━━━━╋━━╋━━╋━━╋━━╋━━╋━━━净OD值