文档介绍：核酸的分离、提取、[实验目的]核酸的分离纯化是核酸制备及分析的前提和基础,通过本实验将学会和掌握核酸制备的一些基本操作和方法,通过电泳等实验技术研究核酸的性质,同时掌握用PCR技术分析不同材料之间亲缘关系的方法。[实验原理]由于不同的生物材料细胞壁的结构和组成不同,而细胞壁结构的破坏是提取总DNA的关键步骤。同时细胞内的物质也根据生物种类的不同而有差异,因此不同生物采用的提取方法也不同,一般要根据具体的情况来设计实验方法。本实验采用CTAB法提取竹子、香樟的DNA。植物叶片经液氮研磨,可使细胞壁破裂,加入去污剂(如CTAB),可使核蛋白体解析,然后使蛋白和多糖杂质沉淀,DNA进入水相,再用酚、***仿抽提纯化。本实验采用CTAB法,其主要作用是破膜。CTAB是一种非离子去污剂,能溶解膜蛋白与脂肪,也可解聚核蛋白。植物材料在CTAB的处理下,结合65℃水浴使细胞裂解、蛋白质变性、DNA被释放出来。CTAB与核酸形成复合物,此复合物在高盐(>)浓度下可溶,并稳定存在,但在低盐浓度(-)下CTAB-核酸复合物就因溶解度降低而沉淀,而大部分的蛋白质及多糖等仍溶解于溶液中。经过***仿/异戊醇(24:1)抽提去除蛋白质、多糖、色素等来纯化DNA,最后经异丙醇或乙醇等沉淀剂将DNA沉淀分离出来。[实验器材]1、冰箱2、恒温水浴锅3、高速离心机4、陶瓷研钵和杵子5、离心管6、植物材料7、微量加样器[实验试剂]***溴化铵(CTAB)***氨基甲烷(Tris)***四乙酸(EDTA)4.***-.***[实验步骤]1、分别称取2g新鲜的竹子、香樟叶片,用蒸馏水冲洗叶面,滤纸吸干水分。2、将叶片剪成1cm长,置预冷的研钵中,倒入液氮,尽快研磨成粉末。3、加入800μl的CTAB提取缓冲液,混匀(CTAB在65℃水浴预热),保温30Min,每5min轻轻震荡几次。,加入等体积***仿振荡2~3min,使两者混合均匀;4、10000rpm离心10min,移液器轻轻地吸取上清液至另一新的灭菌离心管中;5、加入2/3倍体积的异丙醇,将离心管慢慢上下摇动30s,使异丙醇与水层充分混合室温放置15min至能见到DNA絮状物;6、10000rpm离心1min后,立即倒掉液体,注意勿将白色DNA沉淀倒出7、加入800μl75--80%的乙醇(均可以),洗涤DNA;8、10000rpm离心30s后,立即倒掉液体,干燥DNA(自然风干或用风筒吹干);9、加入50μl双蒸水,使DNA溶解。10、提取的DNA样品跑电泳,电泳图如下[实验结果]样孔②为竹子,样孔③为香樟由图看出DNA提取浓度不太高,可能是液氮研磨时放置太久所致[注意事项]1、液氮研磨时,小心操作,以免冻伤。2、所有操作均需温和,避免剧烈震荡。,因此第一步的操作应迅速,以免组织解冻,导致细胞裂解,释放出DNA酶,使DNA降解。[思考题]CTAB、的作用是什么?答:CTAB可使核蛋白体解析,然后使蛋白和多糖杂质沉淀本实验采用CTAB法,其主要作用是破膜。CTAB是一种非离子去污剂,能溶解膜蛋白与脂肪,也可解聚核蛋白。液氮研磨的原理是什么?答:液氮变为气体时要吸收大量的