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际踉诘鞍字恃芯恐械挠τ⋯谱学杂波志王桂芳,张则婷旃,刘晓黎佳叶炎生畲痈,刘买利孙引言琼。,白第卷第年月核磁共振技术忠驯还惴河τ糜诨А⑸镅В牧涎Ъ吧镆窖У攘煊颍分子中的,癗,引茸孕孔邮/说腘通常被用来确定物质的组成及分子结构.”捎谄渥陨淼挠诺闳纾悍岫雀,具有与·嗟钡牧槊度;化学位移分布广且对环境敏感;绝大部分生物体内都不含阳蚨薇尘案扇诺龋皇得在某些情况下挥美囱芯砍9婧盋,“,现在。”F子朐臃謋物理国家重点实验室,武埂磁共振中,中国科学院武汉物理与数学研究所,,摘要:因为”俗陨淼奶匦裕缱孕猧/环岫雀,具有与相当的灵敏度;化学位移分布广且对环境敏感;绝大部分生物体内都不含”蚨薇尘案扇诺龋弧ぁ驯还惴河糜诤舜殴舱癯上瘛⒁物化学及生物大分子的研究,,“’诘鞍字式峁埂⒍ρА蛋白质折叠、蛋白质与药物的相互作用及械挠τ茫关键词:”坏鞍字式峁梗坏鞍字识ρВ灰┪锸侗穑籌玞中图分类号:.文献标识码:作者简介:壬程芳闲侥耍┲鳎毖芯吭保饕4邮律锊目葡喙氐难Э萍凹际醴⒄:—.中国科学院武汉文献情报中心,湖北武汉;泄蒲г汗铱蒲际楣菸浜悍止荩蔽浜湖北武汉收稿日期:—菏招薷母迦掌冢基金项目:国家重点基础研究发展计划计划”—,猰簃...一。。’
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冒宵蛋白质昙欠椒谱学中常用来研究分子的定位,代谢及提高对比度Ⅲ.¨脖还惴河糜谘芯康鞍字剩核酸和多糖等生物大分子的结构,动力学及相互作用‘灰咀凼鼋ḿ刑致在蛋白质研究中的应用,包括蛋白质昙欠椒ǎ诘鞍字式峁埂⒍ρА⒌白质折叠、蛋白质与药物的相互作用及~械挠τ茫波杂志第卷篘——狾——狾——狾甆——狾甆——猳琋——狾’∞图唐坊暮咀灏被崂嗨莆锏幕Ы峁筟“.,,,六氟亮氨酸;,三氟亮氨酸;,,四氟亮氨酸;五氟亮氨酸;,炝涟彼幔,三氟异亮氨,一三氟丙氨酸,氟丙氨酸悖。’酸;影彼幔,三氟缬氨酸;彼幔三氟甲硫氨酸;琢虬彼幔,,。,!狾—ぁ!狢————。一,。—,.—..。,⋯.,,,玥,,一,,,籺,籺,,,,。‘
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第¨王桂芳等:”际踉诘鞍字恃芯恐械挠τ琋——狾煲籆狢———狾甆——狾—籆—猚狢—.四氟酪氧酸:氟组氧酸;榘彼图捎玫暮枷阕灏被崂嗨莆锏幕Ы峁“.一氟苯丙氨酸氟苯丙氨酸;氟苯丙氨酸;,奖彼幔,,五氟苯丙氨酸;ò彼幔氟色氨酸;环馑幔氟酪氨酸;~氟酪氨酸;,二氟酪氨酸;,二氟酪氨酸;,,,至:.—,,,,阯℃,,,。。¨,,,,一。‘
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波谱学杂第卷蛋白质中¨秸氲囊胫饕0种方法:锖铣煞椒ǎ褪窃诘鞍字时泶培养基中添加含氟氨基酸的类似物,,通过生物合成来实现氟的定点标记的产率大大提高,已可用于难芯浚化学连接方法,主要利用某些氨基酸侧链的化学反应活性,通过单一位点突变和控制反应条件,,为表征难以重组表达、:亮氨酸、异亮氨酸、缬氨酸、丙氨酸、脯氨酸和甲硫氨酸等缓姆枷阕灏基酸类似物如图荆徽庑┌被岫己幸桓龌蚨喔龇樱蛋白质中脂肪族和芳香族含氟氨基酸类似物的引入通常利用营养缺陷型大肠杆菌来完成,在培养基中加入含氟的氨基酸类似物,,脂肪族含氟氨基酸类似物三氟甲硫氨酸和环涟彼岬亩拘越大,所以引入这趾被崾毙枰O蚺嘌屑尤牒被岷筒缓烊话被的混合物以降低对细胞的毒性淮送猓,,,涣涟彼岷,一三氟缬氨酸高水平引入时还需要同时过表达相应的天然氨酰基一合成酶。‘“’;.除利用营养缺陷型菌株外,还可以在表达培养基中加人草甘膦利用普通的大肠杆菌表达菌株来合成含氟目标蛋白。.在目标蛋白诱导表达前尤氩莞熟止内源芳香族氨基酸的合成,同时向培养基中添加氟代酪氨酸、苯丙氨酸或色氨酸进行蛋白的定点标记,并补充不需要标记的其他芳香族氨基酸缓以保证大肠杆菌的正常生长和蛋白的表达,这些氟代芳香族氨基酸的摄入率可高达%“.利用这种方法我们可以对蛋白进行帧种或者趾枷阕灏被岬耐北昙“.非天然氨基酸标记芯克鵖芯孔榉⒚鞯睦肨终止密码子定点引入非天然氨基酸的方法已广泛用于细胞生物学,利用共表达正交一/苯丙氨酸一合成酶,将奖彼岫ǖ阋氲降鞍字噬鲜墙显绲摹标记技术之一⋯,目前已有不少相关的应用报道『。壳案慕姆