文档介绍：Secrecy:㈣o㈣。7。1‘:MIAOMeng—MengAdvisor:WANGZhi—XingMajor:BiochemistryandMolecularBiologySpecialty:icEngineeringJune2011厂中国农业科学院硕士学位论文评阅人、答辩委员会签名表论文题目凝集素基因克隆及功能分析生物化学与分论文作者苗猛猛专业研究方向植物基因工程子生物学指导教师王志兴培养单位(研究所)生物技术研究所姓名职称硕(博)单位专业签名评硕导口中国农业科学院生物生物化学与\裴新梧研究员博导口技术研究所分子生物学阅人于静娟教授硕导口中国农业大学生物化学与\博导口分子生物学答辩硕导口中国农业科学院生物生物化学与唷4趟主席贾士荣研究员博导口技术研究所分子生物学硕导口生物化学与鳓师柴团耀研究员中国科学院研究生院博导口分子生物学硕导口生物化学与讹璐答沈世华研究员中国科学院植物所博导口分子生物学硕导口中国农业科学院生物生物化学与柴利程辩裴新梧研究员博导口技术研究所分子生物学硕导口中国农业科学院生物生物化学与一雾从委刘昱辉副研究员4/(秘书)吕少溥论文答辩时间地点2011年6月13日8:30生物所214会议室独创性声明本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知,除了文中特别加以标注和致谢的地方外,论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果,也不包含为获得中国农业科学院或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名:毒;谴硷时间:劫,/年‘月关于论文使用授权的声明本人完全了解中国农业科学院有关保留、使用学位论文的规定,即:中国农业科学院有权保留送交论文的复印件和磁盘,允许论文被查阅和借阅,可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意中国农业科学院可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。研究生签名:尚趁盐导师签名:{5弛时间:Ⅺf1年衫月。7日时间:勘,f年多月’7日广摘要目前农业生产中,蚜虫危害十分严重,造成巨大的经济损失。转基因技术的发展为植物抗蚜品种的培育开辟了新的途径。已有研究表明,植物凝集素作为一种非免疫球蛋白,是一种潜在的抗蚜候选蛋白。因此,本研究拟以抗蚜虫的三叶半夏、掌叶半夏及海芋为材料进行凝集素基因的克隆,并导入到模式植物烟草中进行抗蚜能力分析,以期为植物抗蚜基因工程的研究提供新的基因源。主要研究结果如下:1、根据已获得的天南星科凝集素基因保守区序列设计简并引物,利用同源克隆技术以提取的三叶半夏RNA反转录得到的cDNA为模板,通过Ⅸ’R扩增获得了约400bp的基因片段,然后通过3’和5’RACE技术克隆得到了该基因的全长cDNA序列,序列分析表明:该基因cDNA全长为1173bp,开放读码框为810bp,编码269个氨基酸的前体蛋白;编码蛋白包含3个QDNY结构域,即甘露糖结合位点,推测其可能为凝集素基因;然后与已公布的凝集素进行同源性分析,发现该基因编码蛋白与其他天南星科凝集素基因编码蛋白相似性介于76%一91%,进一步说明了该基因可能为单子叶甘露糖凝集素基因,命名为PtLec。2、按照相似方法,从海芋中获得了一个基因的全长cDNA序列,序列分析表明:该基因cDNA全长为1093bp,开放读码框为813bp,编码270个氨基酸的前体蛋白;编码蛋白包含2个QDNY结构域,即甘露糖结合位点,猜测其可能为凝集素基因;然后将其与已公布的凝集素序列进行同源性分析,发现该基因的编码蛋白与其他天南星科凝集素基因的编码蛋白的相似性介于75%一86%,进一步说明了该基因可能为单子叶甘露糖结合凝集素基因,命名为AmLec。3、我们通过同样技术从掌叶半夏中克隆得到了一个基因的全长cDNA序列,序列分析表明:该基因cDNA全长为1112bp,开放读码框为810bp,编码269个氨基酸的前体蛋白;该基因编码的蛋白包含2个QDNY结构域,即甘露糖结合位点,猜测其可能为凝集素基因:通过与已公布的凝集素序列进行同源性分析,发现该基因的编码蛋白与其他天南星科凝集素基因的编码蛋白的相似性介于75%一84%,进一步说明了该基因可能为单子叶甘露糖凝集素基因,命名为PpLec一4、将获得的三个凝集素基因分别构建了RbcSl和35S启动子驱动的植物表达载体,并通过农杆菌介导法转化烟草,获得了由Rb