文档介绍：实验四SDS聚丙烯酰***凝胶电泳测蛋白质分子量姓名:mangogolaSDS聚丙烯酰***凝胶电泳测定蛋白质分子量的原理是:蛋白质在电泳中的迁移速率取决于其所带电荷、分子大小以及形状等因素,而大多数蛋白质与SDS按一定比例结合(1::g),这样使各种蛋白质的SDS-复合物都带上相同密度的负电荷,而且形状为短轴相同的雪茄烟形。由此蛋白质分子的电泳迁移率仅取决于其分子量,在特定凝胶浓度下,一定范围内的蛋白质分子量对数与迁移率呈直线关系,选择分子量范围和性质与待测样品相近的蛋白质作标准蛋白,与样品同时电泳计算得到标准曲线,并根据待测样品的相对迁移率在标准曲线上查出其分子量。%,%[Acr(30%):Bis(%)]-Hcl(%SDS)(原液)6ul将以上成分加入小烧杯中轻轻摇匀,加入10%,摇匀后灌胶。分离胶浓度12%,%[Acr(30%):Bis(%)]-Hcl(%SDS)(原液)6ul将以上成分加入小烧杯中轻轻摇匀,加入10%,摇匀后灌胶。,插入制孔器,在距制孔器下端1cm处做一标记,取下制孔器将分离胶溶液加入两块玻璃板之间至标记处。,目的是使凝胶面平整,放置待其聚合凝固。,放入制孔器,用滴管灌入浓缩胶至玻璃板顶端待其聚合凝固。(),,混匀后沸水浴5min,冷却。(沸水浴的目的是使蛋白质变性成肽链,便于与SDS结合,甘油可以增加蛋白质的比重,便于沉降到加样孔底部,不易飘散),然后轻轻拔出制孔器,加样后连接电泳仪,记录每个加样孔的样品类型及上样量。浓缩胶使用50V恒压,分离胶使用100V恒压。,取出凝胶,切去浓缩胶部分及染料前端至分离胶底端部分,并在剩余胶片的右上角切去一块作为标记。而后转入盛有染色液的大培养皿中,,,最后用低浓度甲醇溶液脱色过夜至背景脱色。:类别分子量M㏒M样品迁移距离(cm)染料迁移距离(cm)