文档介绍：实验四清热药的体抑抗菌实验【实验目的】通过实验,掌握中药体外抗菌实验的方法,了解清热药对病原菌的抑制和杀死作用。【实验原理】【实验内容】【实验组织】班级进行分组,每个实验小组3名学生;每4个实验小组组由一名专业教师或实验教师(兼职教师)进行指导。【实验准备】菌种根据实验条件可选用大肠杆菌、沙门氏杆菌、肺炎球菌、链球菌、绿脓杆菌、金黄葡萄球菌,一种或数种。先接种在适于生长的培养基内,置于37℃恒温箱中培养24h,待菌种复壮后使用。再取复壮的菌种一环,放在适宜的培养基内,置于37℃恒温箱中培养。培养时间及所需培养基因细菌的各类不同而异。一般细菌培养6h,菌液浓度每ml相当于9亿左右,再用肉汤液1:500稀释后供使用。链球菌、肺炎双球菌等培养18h,菌液浓度相当于每ml3亿左右,再用肉汤液1:5稀释后供使用。培养基一般细菌如葡萄球菌、肠道杆菌等,可采用普通肉汤培养基或普通肉汤琼脂培养基。链球菌、肺炎双球菌等对营养要求较高的病原菌,可采用羊血肉汤培养基。实验器材试管(高压灭菌后备用),接种环,酒精灯等。实验药品清热药如黄连、黄芩、地丁、栀子等。将欲试药物制成100%水煎剂(1:1煎剂)。(即8lb)气压灭菌20min,冷却后置冰箱中备用。【方法步骤】试管法用普通肉汤培养基或羊血肉汤培养基与100%中药煎剂进行倍比稀释(第一管双倍培养基),稀释度为1:2、1:4、1:8……1:256,每管量为1ml。然后将菌液分别接种于不同浓度的药液培养基中,。同时设药液(药液与培养基1:2);细菌(:1);培养基(不加药液与菌液)各一管,做为对照。将上述试管摇匀后,置于37℃恒温箱中培养24h,再观察结果。平板法先将药物按试管法稀释为1:2~1:256等不同浓度。将各稀释度的药液1ml,置于无菌平皿中,然后将各平皿加已溶化的琼脂培养基9ml,迅速与药液混匀,对照用10ml琼脂培养基。已凝固的平板作标记后置于37℃恒温箱中1~2h,使其水分干燥。取出平皿,将细菌以划线法接种于平板上,再置于37℃恒温箱内培养24h后观察结果。【数