酶联免疫吸附试验ELISA.ppt

文档介绍：实验四酶联免疫吸附试验(ELISA)免疫标记技术定义:将抗原-抗体反应与标记技术相结合,用放射性同位素、酶或荧光素标记的已知抗体或抗原,通过检测标记物,间接测定未知的抗原或抗体。分类:放射免疫测定法:131I,32P免疫荧光技术:FITC,PE免疫酶测定法:HRP,AP免疫酶测定法(EnzymeImmunoAssay,EIA)用酶标记的抗原或抗体进行的抗原抗体反应。辣根过氧化物酶(HRP),碱性磷酸酶(AP)特点:高度特异性:保持抗原抗体反应的特异性高灵敏度:酶催化底物显色的高效性,p***平微量检测定性定量检测:反应液颜色深浅或光密度值分类:酶联免疫吸附试验:可溶性抗原或抗体酶免疫组化法:组织中或细胞表面的抗原。酶联免疫吸附试验(Enzyme-LinkedImmunoSorbentAssay,ELISA)用酶标记抗原或抗体检测液体(血液、细胞液)中未知抗体或抗原的方法。(1)利用抗原与抗体的特异反应将待测物与酶连接(或建立关联)。(2)通过酶与底物产生颜色反应,用于定量测定。它将酶促反应的高效率和免疫反应的高度专一性有机地结合起来,可对生物体内各种微量有机物的含量进行测定。测定的对象可以是抗体也可以是抗原。(directELISA):将已知抗原直接吸附于载体,加酶标抗体检测抗体间接法(IndirectELISA):将已知抗原吸附于固相载体,加酶标记二抗检测液相中未知抗体双抗体夹心法(SandwichELISA):将已知抗体吸附于固相载体,petitiveELISA):将已知抗体或抗原吸附于固相载体,酶标记抗原或抗体检测液相中的可溶性抗原或抗体(1) 直接法测定抗原A.     将抗原吸附在载体表面;B.     加酶标抗体,形成抗原—抗体复合物;。底物的降解量=抗原量。(2)间接法测定抗体A.     将抗原吸附于固相载体表面;B.     加抗体,形成抗原-抗体复合物;C.     加酶标抗体;。测定底物的降解量=抗体量。(3)双抗体夹心法测定抗原A.     将抗体吸附于固相表面;B.     加待检抗原,形成抗原-抗体复合物;C.    加酶标抗体;。底物的降解量=抗原量。(4)竞争法测定抗原A.    将抗体吸附在固相载体表面;,竞争结合抗体;对照只加入酶标抗原;。对照孔与样品孔底物降解量的差=未知抗原量。酶联免疫吸附试验(Enzyme-LinkedImmunoSorbentAssay,ELISA)(以间接ELISA为例):显色