课题3 血红蛋白的提取和分离 (2).pptx

文档介绍：课题三血红蛋白的提取和分离专题五DNA和蛋白质技术课题背景蛋白质是生命活动不可缺少的物质。随着人类基因组计划的进展以及多种生物基因组测序工作的完成,人类跨入了后基因组和蛋白质组时代。对蛋白质的研究与应用,首先需要获得纯度较高的蛋白质。因此,从复杂的细胞混合物中提取、分离高纯度的蛋白质是生物科学研究中经常要做的工作。;;;。一、基础知识:(一)蛋白质提取和分离原理(二)蛋白质提取和分离的方法1)凝胶色谱法:又称分配色谱法2)电泳法(三)缓冲液的作用二、实验操作----蛋白质的物理化学性质差异:、)凝胶色谱法(1)原理:(2)材料:凝胶大分子通过多孔凝胶颗粒的间隙,路程短,流动快;小分子穿过多孔凝胶颗粒的内部,路程长,流动慢。凝胶是微小的多孔性球体,如葡聚糖或琼脂糖。:洗脱:从色谱柱上端不断注入缓冲液,促使蛋白质分子的差速流动。混合物上柱洗脱大分子流动快小分子流动慢收集大分子收集小分子2)凝胶电泳法:原理:不同蛋白质的带电性质(正电荷或负电荷)、电量、形状和大小不同,在电场中受到的作用力大小、方向、阻力不同,导致不同蛋白质在电场中的运动方向和运动速度不同。影响蛋白质分子运动速度的因素电泳:带电粒子在电场的作用下发生迁移的过程思考:蛋白质为什么带有电荷?在一定的PH下,蛋白质可解离的基团会带上电荷3)常用电泳方法琼脂糖凝胶电泳聚丙酰***凝胶电泳SDS-聚丙烯酰***凝胶电泳加入带负电荷多的SDS,形成“蛋白质-SDS复合物”,使蛋白质迁移速率仅取决于分子大小。