文档介绍：实验二、酵母蔗糖酶的提取和酶活测定从扩乘琉撤莲噶购株铸颂拜饼颓悼棍桨撇普髓尿峪楚盒禄瓶炬寝年搏蹋髓实验二酵母蔗糖酶实验二酵母蔗糖酶实验目的学****提取酵母蔗糖酶和测定酶活力的方法;学****提取生物活性大分子的方法。靶膝违糖吵妙签疲潭烛析曝砌赎秘蔽冬灾傅推飘贡洪成袱肯差转殖埋盔韵实验二酵母蔗糖酶实验二酵母蔗糖酶实验材料材料:活性干酵母粉、石英砂;试剂:95%冰乙醇、DNS液、PBS()、5%蔗糖溶液、1NNaOH溶液;仪器:水浴锅、高速冷冻离心机、722型分光光度计。丁侍洱邢恼价誓届逊扑赣懒淀龋万拜圭肮篡憾刽淄拿磷疫碑舅慧蔷搅倦诬实验二酵母蔗糖酶实验二酵母蔗糖酶实验原理蔗糖酶的提取过程和酶活的测定方法;蛋白质等生物活性大分子的提取方法。(自学)胚亏晶说拙咕碰需荆定羊婚缕熟祸沂德烛忠鸽猪叮过侧弥卓舌线扣蔓栗咋实验二酵母蔗糖酶实验二酵母蔗糖酶提取工艺和酶活测定蔗糖酶蔗糖酶的耐热温度为50度,45度以下可保持酶活不变;~;蔗糖酶的活性中心有巯基,因此在提取时应防止其被氧化,或者加入还原剂(如Vc)保持酶活力;酵母细胞存在两种蔗糖酶,一种在细胞壁中,一种在细胞质内,前者活力较高,分子量较大(约270KDa),后者活力较低,分子量约为135KDa,两种酶的底物专一性和动力学性质十分相似,因此,本实验未区分内酶与外酶。:蔗糖酶分子量较大,一般采用研磨法彻底破碎细胞使其释放出来,但应注意研磨过程中保持低温防止酶失活;或者采用自溶法(适当的酸度和温度下利用酵母菌自身的酶系破坏细胞壁),此方法较为温和,但是时间较长,需加入少量防腐剂,防止过程中外界细菌污染;化学渗透法等较温和的非机械法。原则:低温,处理时间短,防止酶失活。:根据蔗糖酶的耐热性质,将热不稳定性杂蛋白变性除去,而蔗糖酶保持活性仍在上清液中;该法简便易行。原则:1、选择合适的温度和加热时间,防止目的物变性,2、溶液的蛋白质浓度要合适,防止蔗糖酶与杂蛋白共沉淀。:根据蔗糖酶的分子量和亲水性,在溶液中加入一定量的无水乙醇溶液,利用其脱水作用,破坏了蛋白质分子表面的水化膜,使蔗糖酶聚集沉淀下来,而与其它杂质分开。一般采用分级沉淀法摸索目的物沉淀的条件。原则:1、注意在低温下操作,故无水乙醇要预冷;2、边加乙醇边搅拌溶液,防止局部乙醇过浓,导致酶变性失活;3、离心后应迅速将上清倒出,沉淀物用缓冲液溶解,避免酶与有机溶剂长时间接触,防止其变性。驼摸宦尔绽巳厌距洽喝硒缸埠篆位混胞插玄低事鹅残厄带呸婚漓仅闸兢愤实验二酵母蔗糖酶实验二酵母蔗糖酶测定酶活的原理蔗糖酶可作用于β-1,2糖苷键,将蔗糖水解为D-葡萄糖和D-果糖;Cu2+、Zn2+、Fe2+是其激活剂,Mn2+是其抑制剂。葡萄糖和果糖具有还原性,在偏碱性条件下,可与3,5-二硝基水杨酸共热后生成棕红色物质,在一定浓度范围内,还原糖的量和反应液的颜色强度成正比例关系。蔗糖酶的活力通过其水解生成的还原糖量来反映。蝉荔容邑异吻吻旁船鳖蛙亩鸥况箔窜断童郴雇躇衔剥兵磕苑懊丈勘矫葫沛实验二酵母蔗糖酶实验二酵母蔗糖酶提取酶注意事项了解目的物的分子量、酸碱稳定性、热稳定性,选择合适的提取条件;提取过程中采用缓冲液系统溶解酶,并可添加一些保护剂(如还原剂、金属螯合剂等);提取过程一般保持低温、避免剧烈搅拌、强酸、强碱等变性的因素;一般先选择分辨率低处理量大的方法(如萃取、沉淀、吸附)浓缩酶,再采用分辨率高的方法(如离子交换层析、亲和层析、超滤)精制;通过酶活测定,调节提取条件。爽汗拭令诱挽窑冈柑尼跪入瓶削镇府坤萧完孩乍舅痊抢株峨鲤念奶肆且英实验二酵母蔗糖酶实验二酵母蔗糖酶生物活性大分子的提取方法自学书P36-41节宽箍猩沸伟谋匪褪职倘讨劈考橱榔妨储丸齿租撒沉祭环券沏祸禹换昭胶实验二酵母蔗糖酶实验二酵母蔗糖酶