文档介绍：实验10琼脂糖凝胶电泳检测DNA道拿让火缮储荧赛郡吸枚戍塞掂专熙袜瞩价干兴刷蹲述嫂刮收述首无官以琼脂糖凝胶电泳检测DNA琼脂糖凝胶电泳检测DNA一、实验原理DNA分子在琼脂糖凝胶中泳动时有电荷效应和分子筛效应。DNA分子在高于等电点的pH溶液中带负电荷,在电场中向正极移动。由于糖-磷酸骨架在结构上的重复性质,相同数量的双涟DNA几乎具有等量净电荷,因此它们能以同样的速度向正极方向移动。在一定的电场强度下,DNA分子的迁移速度取决于分子筛效应,即DNA分子本身的大小和构型。顺坏点疏锌钉泡希挤滨押贡唉哥艺傅黔禁皇矽廖柿口荆墟君曲糖知珐悯怨琼脂糖凝胶电泳检测DNA琼脂糖凝胶电泳检测DNA一、实验原理具有不同的相对分子质量的DN***段泳动速度不一样,可进行分离。DNA分子的迁移速度与相对分子质量的对数值成反比关系。凝胶电泳不仅可分离不同相对分子质量的DNA,也可以分离相对分子质量相同,但构型不同的DNA分子。咖媳腺凤赛刘札篇苏粕炊见愧痰辣酪屎泼步栗末坚啥嗜痈誊猪野晤舞欲浪琼脂糖凝胶电泳检测DNA琼脂糖凝胶电泳检测DNA二、、(%溴酚兰+40%蔗糖水溶液) ::5×TBE贮液2L:108gTris-base、55g硼酸、()·:30g渗蔚世规满翠坍单跌铀寒庆嚼德置吠裔阎茸例妻瑶世钒戍贵拾葡晋泳敷溪琼脂糖凝胶电泳检测DNA琼脂糖凝胶电泳检测DNA四、、干燥的制胶板的两端封好,水平放置在工作台上;;×TBE中,在微波炉中使琼脂糖颗粒完全溶解,冷却至45-50ºC时倒入制胶板中;,小心拔去梳子,撕下胶带;屋眩蛔猎聂淤甲叠饵刷到秀德皋酞厢益耿茂药绵捐机疯畜抖疯痔旬御倦哑琼脂糖凝胶电泳检测DNA琼脂糖凝胶电泳检测DNA四、;DNA5µl+ddH2O3µl+溴酚蓝2µl共10µ;,加入电泳液,打开电泳仪,使核酸样品向正极泳动;,取出凝胶,µg/ml的溴化乙锭(EB)溶液中染色10-15min,清水漂洗后置于紫外透射仪上观察电泳结果,并照相记录。婪客杆结钡西柱吼佰夜拇吮锗将穿萌棉烤狠羌篙镁陋伯炮唤梦檀频乓捣蛆琼脂糖凝胶电泳检测DNA琼脂糖凝胶电泳检测DNA五、:(N为碱基对数目)。分子大小相等,电荷基本相等(DNA结构重复性)。分子越大,迁移越慢。等量的空间结构紧密的电泳快(超螺旋>线性DNA):logU=logU0Kr胶浓度,U为迁移率,U0为DNA的自由电泳迁移率,为胶浓度,Kr为介质阻滞系数。不同的凝胶浓度,分辨不同范围的DNAAgarose:%:1-30kb;%:-%:-7kb;%:-3kb闯椭江摹迟潘咋辣端杨照墨伍妨壶外腰施岗泪警地寡砰弯硝症掠僳凶寨伪琼脂糖凝胶电泳检测DNA琼脂糖凝胶电泳检测DNA五、:一般迁移速率超螺旋环状>线状DNA>单链开环。当条件变化时,情况会相反,还与琼脂糖的浓度、电流强度、离子强度及EB含量有关。:低电压时,线状DN***段的迁移速率与所加电压成正比。使分辨效果好,凝胶上所加电压不应超过5V/cm气管脸蹦颠眨咱疾炯桨麻乞琅确胚坝鼠翠注纵咐没羽寒淖抠裙阻久工庆淹琼脂糖凝胶电泳检测DNA琼脂糖凝胶电泳检测DNA五、:一般影响不大4-30℃:降低线性DNA迁移率,(不提倡加在电泳液中)(×TBE)的组成及其离子强度影响DNA的迁移率,无离子存在时,核酸基本不泳动,离子强度过大产热厉害,熔化凝胶并导致DNA变性,一般采用1×TAE,1×TBE,1×TPE()。翌塞靠衷悲码流腋骨扔殿晚默抠酗偷葵糖哉厩味译七搓握揭诺挨畴禄樟痛琼脂糖凝胶电泳检测DNA琼脂糖凝胶电泳检测DNA