文档介绍：
基于 Red 重组系统对 HCMV BAC Towne
UL49 基因的改造#
赵高翔,周天鸿**
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(暨南大学生命科学技术学院,广州 510632)
摘要:本研究以 HCMV BAC Towne 为平台,利用 Red 同源重组技术,首先通过阿拉伯糖进
行诱导表达相应的重组酶,然后将线性的带有同源臂的 RPSL-Neo 正负筛选框电转化进入含
有 HCMV BAC Towne 和 PKD46 质粒的 DH10B 宿主菌中,使带有同源臂的线性 rpsl-neo 正
负筛选表达框与相应的目的基因发生同源重组,从而替换掉 UL49 基因。替换成功的菌利用
其在卡那霉素中可以生长,而在链霉素中却不能生长的特性,将构建成功的菌进行初步的筛
出,再经过 PCR 及测序进一步鉴定,鉴定正确的菌命名为 BAC-Towne-DL49。成功构建了
缺失表达 HCMV UL49 基因的新的 HCMV BAC Towne,为后续的转染细胞提供了一个有效
的载体,为进一步研究 HCMV UL49 的功能奠定了基础。
关键词:人巨细胞病毒;BAC;同源重组;UL49 基因;缺失突变
中图分类号:Q78
Renovation of HCMV BAC Towne UL49 gene via
Red-mediated bination system
ZHAO Gaoxiang, ZHOU Tianhong
(College of Life Science and Technology, Jinan University, GuangZhou 510632)
Abstract: HCMV BAC Towne mitted to research in this topic by Red-bination
systems. The expression of genes mediating Red bination was first induced by the addition
of L-arabinose. Then,the linear rpsl-neo counter-selection cassette flanked by homologous arms
“hm” was electroporated into the DH10B strain carrying HCMV BAC Towne and PKD46
plasmid. And Red bination inserted the functional cassette into the target locus. Only
colonies carrying the modified BAC will survive kanamycin selection on the agar plates and
e streptomycin sensitive. The essful integration of the counter-selection cassette will be
monitored by PCR and DNA sequencing. The correct colo