文档介绍：第16章原生质体培养与融合原生质体培养的意义原生质体操作方法原生质体融合的意义融合方法体细胞杂种鉴定方法原生质体(Protoplast)1880,Hanstein:质壁分离时,能够与细胞壁分开的那部分细胞物质。含义:去掉细胞壁的由质膜包裹、具有生活力的裸露细胞。细胞微丝叶绿体线粒体质膜液泡细胞核内质网微管细胞壁高尔基体植物细胞模式图细胞壁由三种主要成分构成纤维素25-50%、半纤维素53%和果胶5%一、原生质体培养发展简史及其意义1、发展简史1892年:Klercker机械法(利刃)分离原生质体;1960年:1960年英国诺丁汉大学Cocking教授率先利用真菌纤维素酶,制备了大量具有高度活性可再生的番茄幼根细胞原生质体;1968年:纤维素酶和果胶酶投入市场;1968年:Takebe首先用商品酶进行原生质体分离:烟草叶肉原生质体,两步法和一步法。1971年:Takebe培养烟草叶肉原生质体,首次获得再生植株。 1993年有49个科、146个属的320多种植物,经原生质体培养得到了再生植株。其趋势主要是农作物和经济植物,从一年生扩展到多年生,从草本到木本、从高等植物到低等植物,食用菌、藻类、大豆、棉花、油菜、水稻、玉米、柑桔、猕猴桃、桃、苹果、马铃薯、胡萝卜、黄瓜、杨树、云杉等;1986年:Spangenberg单个原生质体培养成功;2、原生质体培养的意义(1)为细胞融合奠定基础。有性杂交不能进行细胞质交流(2)是遗传工程的理想受体。能够直接摄取外源DNA,细胞器甚至微生物。Isolatedprotoplastarecapableofingesting"foreign",chloroplasts,mitochondria,DNA,plasmids,(3)理论研究细胞壁再生、细胞膜离子转运、病毒侵染。因为细胞壁不仅具有保护功能,还参与细胞的生长和分化等生命活动。但是必须指出:原生质体必须再生出细胞壁才能继续发育。二、原生质体分离及培养(一)分离方法机械法:利刃机械切割酶解法:果胶酶和纤维素酶处理