文档介绍：
绿脓杆菌铜离子调控蛋白 CopR 表达、纯化
和生物活性鉴定#
范充1,2,胡青原1,2,徐一权1,2,乔雨辰1,2,杨雪梅1,2,陈浩1,2**
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10
15
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25
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(1. 南京大学化学化工学院,南京 210093;
2. 配位化学国家重点实验室,南京 210093)
摘要:绿脓杆菌中存在一种参与铜离子调控的 CopR 蛋白。使用 PCR 技术,从绿脓杆菌 PAO1
基因组 DNA 扩增 copR 基因片段,并克隆至大肠杆菌表达载体 pET28a 质粒。重组质粒
CopR-pET28a 转化至大肠杆菌 (DE3)感受态细胞,经 IPTG 诱导表达 CopR 蛋白。
14%SDS-聚丙烯酰***凝胶鉴定结果显示在 kD 有明显表达条带,产物主要以可溶方式表
达。表达产物利用金属螯合层析技术(Ni-NTA)纯化,得到纯度在 80%以上的 CopR 重组
蛋白。凝胶电泳迁移实验(EMSA)鉴定,CopR 蛋白与其启动子区域 DNA 有良好的结合活
性。本文为进一步开展绿脓杆菌中 CopR 调控铜离子的研究提供了基础。
关键词:金属调控蛋白;绿脓杆菌;基因重组;生物活性
中图分类号:Q5
Expression, Purification and Identification of copper ion
regulator CopR of Pseudomonas aeruginosa
FAN Chong1,2, HU Qingyuan1,2, XU Yiquan1,2, QIAO Yuchen1,2, YANG Xuemei1,2,
CHEN Hao1,2
(1. School of Chemistry and Chemical Engineering, Nanjing University, Nanjing 210093;
2. State Key Laboratory of Coordination Chemistry, Nanjing 210093)
Abstract: It has been reported CopR is related to copper ion regulation in Pseudomonas
aeruginosa. copR gene was obtained by PCR using the genomic DNA of Pseudomonas aeruginosa
as template. The amplified fragment was cloned into the vector pET28a and transformed into the
competent cells of (DE3). Upon induction with IPTG, CopR protein could be
expressed well, which showed a distinct band with a molecular weight of kD in 14%
SDS-PAGE. CopR was soluble and it was purified by Nicke