文档介绍：给你找了几个试验方法:,%,%,每孔上层低熔点琼脂含细胞数为2000个,每种细胞共铺5孔。把培养板移入CO2孵箱,在37℃、5%CO2及饱和湿度环境下培养2~3周后倒置显微镜下计数直径大于100μm或含50个细胞以上的克隆,并计算克隆形成率(克隆形成数/接种细胞数×100%=克隆形成率)。、空载体转染组和未转染组细胞以每组600个细胞接种于60mm含底层5g/L琼脂糖和顶层3g/L琼脂糖的软琼脂中;37℃培养箱中培养14d;=克隆数/接种细胞数×100%对照组克隆数-实验组克隆数抑制率=×100%--1琼脂溶液,高温高压灭菌后,于45℃×DMEM培养液,高温高压灭菌后45℃×-1琼脂溶液等体积混匀后,按1mL/孔加入24孔培养板,4℃×-1琼脂溶液等体积混匀,之后加入单细胞悬液并调整细胞终浓度为1×-1,,铺平后室温放置使琼脂凝固,之后置于37℃,-1CO2孵箱中培养2wk,-8910为空白对照和8910-%~80%铺满,然后与20μμmol·I-1的AS-ODN。共孵育4h,之后将细胞重悬于新鲜培养液配制6mL·L-1的底层琼脂,lml/孔加入24孔板中,调整细胞浓度并与4mL·L-1的琼脂混合,,置37℃培养2Wk后计数克隆形成数克隆大于100个细胞着计数。可以用不同密度细胞绘制标准曲线后测细胞密度,也可直接用OD值绘制生长曲线,MTT法具体步骤如下:MTT比色试验:A.[概述],化学名3-(4,5-二***噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑嗅盐,商品名是噻唑蓝,简称为MTT。检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性的MTT还原为难溶性的蓝紫色结晶物formazan并沉积在细胞中,而死细胞无此功能。二***亚砜(DMSO)能溶解细胞中的formazan,用酶联免疫检测仪在490nm波长处测定起光吸收值,可间接反映活细胞量。在一定细胞数范围内,MTT结晶物形成的量与细胞数成正比。该方法已广泛用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验以及肿瘤放射敏感性测定等。它的特点是灵敏度高、重复性好、操作简便、经济、快速、易自动化、无放射性污染、与其他检测细胞活力的方法(如细胞记数法、软琼脂克隆形成试验和3H-TdR掺入试验等)有良好的相关性。B.[用品](1)MTT溶液:称取250mgMTT,放入小烧杯中,加50mlPBS(,)在电磁力搅拌机上搅拌30min(普通环境中操作),(超净台内操作),分装,4℃保存。两