文档介绍：慢病毒介导的稳定表达HBx促进HepG2细胞增殖#郑碧云,方雪芬,邹来玉,李丹,黄月红,陈治新,王小众**5(福建医科大学附属协和医院消化内科研究所,福州350001)摘要:目的构建稳定表达HBx的HepG2细胞株,观察HBx对细胞增殖的影响。方法-X中扩增出HBx基因,并以infusion酶连接目的基因和慢病毒表达载体,构建重组慢病毒表达载体Plov-CMV-eGFP-2A-flag-HBx-EF1a-PuroR。应用PCR和测序1015鉴定正确后,将重组慢病毒载体三质粒系统共转染293T细胞包装重组慢病毒颗粒,慢病毒颗粒感染HepG2细胞,经过嘌呤霉素筛选,获得稳定表达HBx基因的新细胞株HepG2-HBx。荧光显微镜下观察细胞荧光表达情况,PCR和Western-K8法检测细胞增殖活性。结果重组慢病毒颗粒感染HepG2细胞后经药物筛选得到稳定表达HBx细胞株HepG2-HBx,荧光显微镜下观察到HepG2-HBx细胞绿色荧光蛋白表达率95%以上。RT-PCR和Western-blot验证了HepG2-HBx细胞能够持续稳定表达HBx基因,HBx促进了肝癌细胞HepG2的增殖。结论成功构建了HBVX重组慢病毒载体,稳定表达的HBx促进了HepG2细胞的增殖。关键词:乙型肝炎病毒;HBx;HepG2;慢病毒载体;细胞增殖中图分类号:,+220Lentivirus-mediatedstablyexpressionofHBxpromotesHepG2cellproliferationZHENGBiyun,FANGXuefen,ZOULaiyu,LiDan,HUANGYuehong,CHENZhixin,WANGXiaozhong253035(DepartmentofGastroenterology,TheAffiliatedUnionHospital,FujianMedicalUniversity,Fuzhou350001,China)Abstract:Abstract:(Plov-CMV-eGFP-2A-flag-HBx-EF1a-PuroR)wasreconstructedbyinsertingthelentiviralvectorwiththeHBxgenefragment,-,andthenproducedbythepackaging293Tcell,