文档介绍：中山大学
硕士学位论文
斑马鱼基因打靶载体的构建及基因打靶的初步研究
姓名:熊茜
申请学位级别:硕士
专业:生物化学与分子生物学
指导教师:徐安龙
20040605
拍瓯嗦氪┝杏爰剿鹈赜憷嗄缭赐葑汗被嵴烂乜屦λ驹葱源摘要鯣疨。Υ鹦蛄校渲形挥冢弘,一的两个应祷元件呈反向摊应霞“陛萌砂呗碛慊蚍霥中扩壤蠢黪危大小上与其他鲤科鱼类的基因存在较大差异,怒迄今为止最大的基因。%。耩在转录起始经点个较:帮酸链,并在痿动子幌糽嘈蛄兄蟹㈣通过ǜ婊蛳低常訥嵋虻钠舳枰捍锘钚约笆闭泶锬J窖抒疆究。鞫建帮表这载体,线蠖识磐注菇入斑马鱼受精饔中,通过报告基因闹甘荆鄄炱涫笨毡泶锬J健K豕砻鳎珿蚱舳‘.侧翼牡骺匦蛄凶阋云鹗蓟虻谋泶铮⑾殖鎏匾斓氖笨辗植肌基于已有的斑马鱼琣基因数据,掷氩⒖寺×予及糽翼寝捌鳕蕉巍e骞鼼擐惫基霾系统,辩§一的启动予表达活性遂⊙芯浚峁砻鳎寺〉摹蚰也秤枘芄挥的启动报告旗因在赴械谋泶铩构建基因打靶载体.,采用双荧光筛选盘一一用基因搀正选择标记基因,嬲虿笫苎≡癖昙腔恳颍冒呗硇蹽蜃槠段传霜源枣梦步死菅譍苛手刈樵靥濉=ú卦刭鹤Ⅶ跞氚呗碛闶茏卵中后,证明上述正、负选择标记基因在胚胎中能够有效表达,并提供阳性打靶胚胎的筛选标记。在斑马瓿胚胎中进行转植基因定点熬合研究,采用双荧光筛选的方法,在转麓嚣豹瓤亵效瘦颓,整努耧穗孛检测到绿色荧毙缨瓣强,绿色荧巍绸憝褒会傣瓣该项研究首次在模忒生物中进行凝因打靶的研究,在模式嫩物斑马鱼中建立了基因修饰技术平台,并验证了它的可行性。采用荧光筛选方法,进行鱼类撼困打靶研究,将对斑马鱼巾熬功糍基因组学研究有熬大瓣意义。斑马鱼、基因打靶载体、生长激素基因、启动予、荧光鬣白邀个胃哺橇苏錾ぜに鼗颉P蛄蟹治霰砻靼呗碛鉍虺ぴ,由鐾庀宰雍个内含子组成。结构分析比较表明,斑马鱼基因在基因启动出现频率约为。关键字:列。
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镪笛论文原创性声明本人郑熬声明:所呈瓮的学位论文,是本人在母师的指导下,独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外,本论文不能含任何其他个久或集藩法经发表或撰篙过豹律鑫藏莱。对本文懿疆究终密羹簧贡献静个人本人承担。年和集体,均融在文中以明确的方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由
缩略语鷜曲氨苄毒霉素碱基对中国仓鼠卵巢细胞双蒸水犬殛耔萤溪乙锭增强型绿色荧光蛋自表达痔劐搽箍异丙基硫代,一半乳糖苻千骧基露千道尔顿斑马鱼生长激素基因读礤框磷酸盐缓暌族纯嚣貔每分钟转数十二烷基磺骥钠篲甓三羌谆氨基甲烷肌动蛋白互乙二胺四乙酸胎牛血清绿色荧光蛋白聚合酶链式反应聚乙二醇红色荧光蛋岛牛血清自蛋内五猤出籥
新基因功能研究的模式生物体的应用。就在这时,斑马鱼——这个体长不足日舌序结果。标志着生命科学由基因组时代进入了以基因功能研究为熏点的后基因组人类基因组计划和其它一些基因组计划的完成只是我们从分子水平认识生命现非编码重复序列蓟蜃樽苄蛄械的作用等问题更没有明确的答案。和大量的信息,另一方面则带来了更多的问题及新的挑战。近年来功能基因组学的研究逐渐走向模式化、规模化、信息可操纵化并且向医药开发领域渗透。模式琀囊桓鲋基因组序列的破译转向基因组功能分析定位,模式动物模型将是一个十分关键的支撑条件。只有通过动物试验,才能从整体水平了解不同基因所决定的表型特征以及基因的相互作用,通过对模式生物体表型变化槐涮的分析,可在动物整体、细胞或分子水平认识基因的功能。国际上现已有科学家在从事通过线虫、果蝇等模式生物体大规模筛选重要功能基因的工作。但线虫和果蝇与人相距甚远,包括造血功能在内的许多人体重要生理功能以及相关的疾病基因,在这些模式生物体内并不存在。而小鼠是公认最好的模式生物体之一,但其繁殖速度较慢,且体积相对较大,表型出现的时间也相对较长,因此限制了其作为大规模高通量厘米的小型热带观赏鱼类,成为科学家们关注的焦点。斑马鱼中的功能基因研究大规模基因诱变筛选斑马鱼成鱼体长不超过,适于实验室内进行大规模的培养。而且其具有胚胎透明早期发育过程全程可视,鱼苗的行为易于观察;可用于饱和诱变,怀卵量大等等优点,使在斑马鱼中进行大规模突变筛选试验变得相当的可行性和具有应用前景【”。同时正是因为具有这种将胚胎学操作与观察和经典遗传学方法联系到一起的优势,斑马鱼日益成为实验室研究重要模式生物之一。基因大规模突变是功能基因组学的重要研究手段。二十年前,4葱缘慕ò呗碛阕魑Nㄒ坏募棺刀镅芯慷韵蠼姓蛞糯У难究。并且建立了一系列有利于斑马鱼进行遗传学大规模筛选的的方法学,如单倍常用的产生斑马鱼突变的方法有三种:已基亚硝脲в盏肌或湎哒丈洹⒉迦胗毡洹是一种约粒谏诚赴跏至亚高达ィ捎谄渫槐涑@奂岸喔龌颍槐涞谋硇屯ǔJ侨舾筛龌蚬δ