文档介绍：中国工业微生物菌种保藏管理中心微生物菌种保藏对于微生物菌种的研究和利用至关重要。以下是中国工业微生物菌种保藏管理中心整理的目前国际国内常用的菌种保藏方法,包括:定期移植法、液体石蜡法、沙土管法、真空冷冻干燥法、80℃冰箱冻结法、液氮超低温冻结法、固体曲保藏法、蒸馏水保藏法,各种菌种保藏方法都有详细的步骤说明。定期移植法亦称传代培养保藏法,包括斜面培养、穿刺培养、液体培养等。是指将菌种接种于适宜的培养基中,最适条件下培养,待生长充分后,于4~6℃进行保存并间隔一定时间进行移植培养的菌种保藏方法。操作步骤如下:,如三角瓶、试管、培养皿、烧杯、吸管等,经洗涤、干燥、包装、灭菌后使用。,按培养基配方称取各项材料,依次将缓冲化合物、主要元素、微量元素、维生素等材料加入水中溶解,最后加足水量,搅拌均匀。,根据要求加稀酸()或稀碱(10%氢氧化钠)调pH值。加酸或碱液时要缓慢、少量、多次搅拌,防止局部过碱或过酸而导致测量不准确和营养成分被破坏。,如琼脂、明胶等。将凝固剂加入液体培养基中,加热并不断搅拌至融解,再补足所蒸发水分。,将配好的培养基趁热过滤并分装。斜面培养基分装量约为试管高度的四分之一(4~5mL),穿刺培养基分装量以试管高度的二分之一为宜。分装过程中勿使培养基沾污管口,以免弄湿棉塞造成污染。,外面包扎一层牛皮纸或铝箔并注明培养基名称及配制日期。,通常蒸汽灭菌为121℃,15~20min。,斜面长度不超过试管管长的二分之一为宜。,通常30℃培养1~3天。无菌检查合格后将其保存于4℃下备用。。适用于扩散型生长及绒毛状气生菌丝类霉菌(如毛霉、根霉等)。。适用于细菌和酵母菌等。“之”字形线。适用于易扩散的细菌,也适用于部分真菌。“之”字形线。能充分利用斜面获得大量菌体细胞,适用于细菌和酵母菌等。,转接到新鲜斜面上。适用灵芝等担子菌类真菌。,从柱状培养基中心自上而下刺入,直到接近管底(勿穿到管底),然后沿原穿刺途径慢慢抽出接种针。适用于细菌和酵母菌等。。3培养将接种后的培养基放入培养箱中,在适宜的条件下培养至细胞稳定期或得到成熟孢子。细菌培养温度一般为30~37℃,真菌培养温度一般为25~28℃。4保藏培养好的菌种于4~6℃保存,根据要求每3~6个月移植一次。某些菌种,如芽裂酵母,阿舒假囊酵母,棉病囊霉等,须1~3个月移植一次。保藏湿度用相对湿度表示,通常为50%~70%。斜面菌种应保藏相继三代培养物以便对照,防止因意外和污染造