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蟪Ω司鹈ǖ鞍追⒔凸ひ仗跫呕芯激光生物学报痡..—...彭智辉,宁毅,丁兴华,李华,邓乐摘要:分别采用培养基、牛肉膏蛋白胨培养基、强化营养培养基、玉米浆培养基对大肠杆菌蟹⒔关键词:大肠杆菌痪ǖ鞍祝环⒔凸ひ眨挥呕中图分类号:文献标识码:文章编号:引起猪仔腹泻的原因很多,其中由产肠毒素的大肠杆菌导致的腹泻是一种仔猪常见病,在世界范围造成严重的经济损失‘6Χ舅卮蟪Ω司致病作用与其具有黏附性菌毛和肠毒素密切相关,第卷第年鲜Ψ洞笱蒲аг海铣ど培养,选出最适于大肠杆菌さ挠衩捉嘌徊捎谜皇笛槎杂衩捉嘌腃/:#疜!的配比进行优化,筛选最适于大肠杆菌さ挠Q浔龋谎芯可で摺⒔又至恳约熬搴途量的相关性,根据实验结果优化发酵培养条件,确定菌种的最佳发酵工艺,以收获最多的ǖ鞍住Q芯表明,蟪Ω司谟衩捉嘌鵆/疜。的配比分别为/,转速为痬,接种量为%的条件下发酵个小时,菌体和菌毛生产量均达到高峰,同时得出菌毛蛋白产生量和菌体量成正相关。,珻甤籪收稿日期:—恍藁厝掌冢基金项目:湖南省教育厅高校创新平台开放基金;湖南师范大学青年基金作者简介:彭智辉,男,湖南邵阳人,讲师,研究方向为环境微生物学与微生物检测技术。缱佑氏—ㄑ蹲髡,,琇珼:%/,,、/“甀,甤疦琄“,畐疭—籪;..’.
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材料和方法峁敕治ǖ鞍椎奶崛『痛炕杆菌,分别取不同培养时间的菌体于培养基的选择分别采用培养基、、、龋餍胁学调查表明,蟪Ω司且鹱兄砀剐旱闹饕致病微生物4蟪Ω司鶮是通过细菌的菌毛与宿主黏膜上皮细胞表面的相应受体结合,从而在该局部组织定居、繁殖和产生毒素,引起小肠黏膜损伤,导致吸收分泌功能失常而致腹泻『目前国内外对大肠杆菌鸬母剐好挥泻好的检测和治疗方法,在检测方面以抗血清凝集实验为主,检测灵敏度和准确率有待提高,另外也可以采用⒘魇较赴呛兔腹艿缬痉椒ḿ觳猓ḿ测成本高,需要仪器和专业技术人员支持,难以达到快速在线检测的目的T谥瘟品矫嬉怨闫卓股素的应用为主,但抗生素的使用没有很好的针对性,治疗效果不明显,而且随着抗生素大量应用造成细菌抗药性和出栏猪抗生素残留问题日益突出因此,寻找和建立一种新的高灵敏度、快速、在线检测方法非常重要,同时在快速检测发现该致病菌的基础上有针对性地使用抗生素或者特异性卵黄抗体,将是今后治疗该菌引起的仔猪腹泻的首选方案‘建立新的检测体系必须有特异性菌毛蛋白的抗体或者适配子作为检测元件,需要首先对大肠杆菌ǖ鞍捉写罅勘泶铩⒎掷牒痛炕匾煨卵黄抗体的制备同样离不开先获得纯化的蛋白抗原。本研究利用原始致病菌株,优化培养基及其组分配比、接种量等发酵工艺条件,同时研究菌毛产生和菌体量相关性,以获得ǖ鞍赘的表达,进一步分离和纯化该蛋白,以用于后续的抗体制备和适配子筛选。菌株蟪Ω司暧芍泄抟轿⑸锞直2中心购得。。实验方法在,痳嫣跫屡嘌鳮大肠杆菌,发酵结束后℃水浴胄谋A羯锨逡骸<尤氡ズ硫酸铵盐析,婀埂痳胄模ǖ玫降蛋白沉淀溶于为的芤褐校肝龀巍凝胶层析纯化,狿鞍啄电泳分析‘¨菌体量和ǖ鞍椎南喙匦员冉本实验验证ǖ鞍撞亢途辶渴欠癯烧相关,利用培养基,在一定条件下