文档介绍：DN***段的扩增——PCR技术【教学目标】(一)认知目标1、了解PCR技术的基本操作步骤。2、理解PCR的原理。3、讨论PCR技术在生产生活中的应用。(二)能力目标1、通过多聚酶链式反应扩增DN***段,锻炼学生实际动手能力。2、通过严格控制温度等反应条件,培养周密的思维能力。(三)情感、态度与价值观目标1、通过对PCR实验的操作及结果分析,培养学生严谨的科学态度和实事求是的科研精神。2、通过对生物高新技术的接触,加深学生对实验科学的热爱。【课题重点】PCR的原理和PCR的基本操作。【课题难点】PCR的原理【教学方法】启发式教学【教学工具】多媒体课件【教学过程】(一)引入新课上课之初先在视频上播放一段中央12套《天网》节目,截取其中法医提取毛发,提取DNA进行与嫌疑人比对的片段。(从学生熟悉的节目场景入手,激发他们心中疑惑已久的探知兴趣)。师:法医提取的毛发里面的DNA量是比较少的,要进行比对需要大量的DNA样品,也就是在比对之间是不是需要先对DNA进行扩增?这就是咱们今天要学****的科技尖端的PCR技术,即:聚合酶链式反应,简称PCR(英文全称:PolymeraseChainReaction)。等学完本课你们要告诉我PCR技术还能应用与什么领域?(二),与细胞内DNA复制过程类似::(引导学生思考需要的条件,师生共同完成下表)条件组分作用模板DNA的两条单链提供复制的模板原料四种脱氧核苷酸合成DNA子链的原料酶解旋酶DNA聚合酶打开DNA双螺旋催化合成DNA子链能量ATP为解螺旋和合成子链供能引物RNA为DNA聚合酶提供合成的3’:解旋酶、ATP,DNA两条链打开,,形成两条DNA单链。引物结合:在DNA单链3’端与DNA反向配对结合,确保引物3’端与DNA单链准确配对。DNA聚合酶结合。子链合成:DNA聚合酶从引物3’端开始,将配对的脱氧核苷酸连接起来。后续加工:DNA聚合酶I将引物切去,并合成空缺处的DNA单链,再由DNA连接酶将不连续的DNA子链连接起来(半不连续合成。先导链,滞后链)子链合成特点:不能从头合成;合成方向为“5’→3’合成”。,我们能不能在体外模仿DNA的复制,进行体外扩增呢?教师引导学生归纳DNA体外扩增需要的条件:解开螺旋:在80~100℃时,DNA双螺旋打开,形成两条DNA单链,称为变性。思考:为何不需要解旋酶?在生物体内的温和条件下就能使DNA的双链解成单链。在没有酶的催化作用下,就必须由外界提供更多的能量才能使DNA分子活化,当在体外加热到90oC—95oC,DNA分子就由常态转化为活跃状态,双链则解成单链。所以PCR技术扩增目的基因不需要解旋酶。恢复螺旋:在50℃左右时,两条DNA单链重新形成双螺旋结构,称为复性。复制条件:缓冲液,DNA模板,四种脱氧核苷酸,热稳定DNA聚合酶,两种引物。思考:引物的作用是什么?DNA的复制都需要引物,在体内复制时,先由RNA聚合酶在DNA的模板上合成一段RNA引物,再由DNA聚合酶从RNA3’端开始合成新的DNA链,产物片段的长度严格地限定在两个引物链5’端之间,是需要扩增的特定片段。(根据PCR原理图示帮助理解)反应场所: