专题一 基因工程.pptx

文档介绍：一、DNA重组技术的基本工具(一)限制性核酸内切酶——“分子手术刀”::特异性,即能够识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列,并且切割每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键,使之断开。︰︰︰︰︰中轴线︰︰︰︰↓↑EcoRⅠ(在G与A之间切割)SmaⅠ(在G与C之间切割)粘性末端平末端切割DNA分子产生的两种不同的末端(箭头表示酶的切割位点)↓↑:在识别序列中轴线两侧切割,产生粘性末端;在识别序列中轴线处切割,产生平末端。GCTTAAAATTCGGCTTAAAATTCG(二)DNA连接酶——“分子缝合针”GCTTAAAATTCG(二)DNA连接酶——“分子缝合针”(二)DNA连接酶——“分子缝合针”:磷酸二酯键,:将互补配对的两个黏性末端连接起来,(按来源分类)(1):(来源于大肠杆菌)只能连接双链DN***段互补的粘性末端(2)T4DNA连接酶:(来源于T4噬菌体)既可以连接双链DN***段互补的粘性末端,又可以“缝合”双链DN***段的平末端(三)基因进入受体细胞的载体——“分子运输车”::能在宿主细胞内复制并稳定地保存;具有多个限制酶切位点,便于目的基因插入;具有标记基因,便于筛选;必需是安全的,对宿主细胞无害。:质粒、λ噬菌体的衍生物、动植物病毒质粒细菌拟核DNA之外能自主复制的小型双链环状DNA分子;DNA分子上具有多个限制酶切割位点;能在宿主细胞中进行自我复制;DNA分子上具有特殊的标记基因;对宿主细胞无影响。二、基因工程的基本操作程序获取目的基因构建表达载体导入受体细胞目的基因检测与鉴定第一步第二步第三步第四步(一)(1)基因组文库将含有某种生物不同基因的许多片段,导入受体菌的群体中储存,各个受体菌分别含有这种生物的不同的基因,称为基因文库。受体菌包含了某种生物所有的基因,该受体菌群体称为这种生物的基因组文库。(2)部分基因文库受体菌包含了一种生物部分基因,该受体菌群体称为这种生物的部分基因文库,如cDNA文库。