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天然吸附剂对大肠杆菌破碎液中蛋白质的吸附性能研究鲁伟,徐进平,王健,孟小林3膨润土叛;硅藻土;盐酸;浜捍笱蒲аг海蔽浜海蛋白质分离提取常用的琼脂糖和葡聚糖等填料,多为进口,价格昂贵,且在制备时常使用溴化氰等剧毒试剂,须采取特殊防护措施。硅藻土、活性白土或膨润土资源丰富,生物相容性较好,具有良好的吸附性能,经加工后可作为蛋白质提取中蛋白质、多肽等大分子的吸附剂。?水底沉积,经自然环境作用而逐渐形成的一种非金属矿物。硅藻土为多孔状结构,孔的形状有圆形、不规则圆形、椭圆形等,孔内有隔膜,空洞排列一般较J定的物理吸附作用及不同程度的离子交换能力。活性白土为灰白色颗粒粉末,可用膨润土、硅藻o有特殊的吸附能力和离子交换性能。我国对膨润土的开发利用已经有多年的历史,其应用范围已涉及到化工、石油、环保等领域。随着人们对其结构特征和理化性能的进一步探讨,特种有机膨润土、柱撑膨润土、增效膨润土、沸石分子筛等高层次膨润土开发利用已成为非金属矿物材料的研究热点。膨润土具有良好的粘结性、分散性和吸附性等,在工业、农业、饲料添加剂等方面有着广泛的用途,曾被称作“万能土”。本研究分别以不同地区的硅藻土、活性白土和各种类型膨润土作为吸附剂,采用不同的实验条件测试其对蛋白质的吸附效果,旨在筛选出成本低,吸附效果好且安全性稳定的蛋白质吸附剂。实验材料与仪器活性白土蕉筒;活性白土叛;高纯度钠基膨润土叛;钙基膨润土叛;饲料级工作液,北京天根;大肠杆菌发酵液鹤圆;3k30SigmaDGS031南京产;一型超声波细胞粉碎仪,浙江宁波产;孔基因扩增牵珺籅一型自动不锈钢发酵罐,上海保兴生物设备工程AHATS司;型高速管式分离机,上海华东知正离心机有限公司产。2HP5EcoliBL21(pQHP)(生命科学学院国家病毒学重点实验室一基因工程药物及昆虫病毒分子生物学实验室构建又值的培养液中,℃振荡培养过夜。次日按接41000的培养基中,℃培OD6000608IPTG04·挥盏急泶铩R陨纤门嘌mgL蛋白备用液的制备与吸咐4hHP10。胄min少量上清液中,于一型超声波细胞粉碎仪中破碎rmin5rainHPBSAgL)E发酵液经离心、破碎,制备成的蛋白备用液吸附后,离心分离出的上清液用法测定蛋白质浓度,以此来计算发酵液上清中蛋白质的残留量,即吸附后的蛋白损失率。筛选出能充分吸附大肠杆菌破碎液中蛋白质、多肽等大分子物质的吸附剂并优化吸附条件。结果表明吸附剂用量控制在ヒ%,值控制在~之间,对蛋白质的活性影响不大,蛋白备用液中蛋白质的回收率均能达到%以上。关键词:硅藻土;活性白土;膨润土;蛋白Q9394A文章编号:———200931(3)3639收稿口期:——作者简介:鲁伟,男工程师WlOAmi10AcidsBiotic
万方数据
81支1mL5离心管5minrrain15。法测定上清液蛋白质的浓度,以此来计算吸附之后的蛋白损失率。中试放大蛋白的发酵采用LJAH(600700Hz)81136L罐中,采用边搅拌、边缓慢加入g6molLHCIpH~,搅拌,用型高速管式离心机离心,得到吸咐混合物和离心上清液。破碎后的蛋白备用液以及吸咐后的上清液同样采用法测定蛋白质的浓度。3不同地区和种类的吸附剂对蛋白备用液作吸附试验的结果与分析用以上方法对不同地区和种类的吸附剂作410215高纯度钠基膨润土叛对菌体破