现代生物技术---曾慧慧部分易湛苗版.doc.doc

文档介绍：曾慧慧部分
氧化还原体系及其抗氧化评价方法和技术
(一)背景知识
:生物大分子的分离、检测、制备和改造技术
:
NADH/FADH2系统、谷胱甘肽过氧化酶系统、硫氧还蛋白/硫氧还蛋白还原酶系统

①脂质氧化性损伤:病毒、细菌毒素、动物毒素损伤;膜流动性(微环境)改变、膜穿孔及破损
痛风病、脑缺氧、缺血损伤、癌细胞
膜损伤标志:膜流动性下降(饱和脂肪酸多,流动性下降;过氧化产物MDA交链,流动性下降)
膜损伤是某些疾病的早期标志
膜流动性评价:直接法:粘度变化测定、自旋标记法
间接法:RBC膜丙二醛(MDA)含量测定
②脂蛋白氧化性损伤:
脂蛋白及其分类:电泳法:乳糜微粒(CM)、前β-脂蛋白(VLDL)、β-脂蛋白(LDL、IDL)、α-脂蛋白(HDL)
超速离心法:乳糜微粒、极低密度脂蛋白、低密度脂蛋白、高密度脂蛋白
脂蛋白构成:CM主要转运TG、TC,诱发胰腺炎;VLDL主要转运内源性TG(一半以上),冠心病;IDLTC上升,动粥;LDL主要内源性TC,动粥;Lp(a)类似于LDL,动粥独立因素或冠心病;HDL主要逆向转运TC,抗LDL氧化
LDL氧化性修饰和心血管病…
脂蛋白分离方法:电泳法、超速离心法
③DNA氧化性损伤:肿瘤
损伤因素:Ca离子、脂质过氧化、羟自由基、光照、氧应激
(二)生化分离技术
:
①生物组织与细胞的破碎
②提取/萃取和沉淀分离技术
③过滤与膜分离技术
④层析分离技术
⑤离心分离技术
⑥电泳分离技术
生物原料的选择和预处理
注意有效成分的含量,包括品种选择、器官选择和生长期选择等
保存生物材料的方法包括速冻和有机脱水等
纯化前预处理:除去结缔组织哪个非活性部分;-20℃保存;有机溶剂去水以延长保存时间;植物叶片洗净、种子泡胀或粉碎等

组织破碎:磨切法:匀浆法/高速组织捣碎机
细胞破碎的需要:制备生物膜制剂、胞内物质的获取
细胞破碎方法:原则:不影响酶活性
①机械破碎法:研磨法:较温和,适宜实验室使用。研钵和研棒或匀浆器,可加石英砂
组织捣碎器法:保持低温,时间不宜太长。捣碎器,可加石英砂;组织匀浆器
压力匀浆法和冻融法:用于破碎培养细胞株和淋巴细胞
②物理破碎法:温度差破碎法:置低温冰冻,取出迅速融化,反复多次
压力差破碎法:气穴作用,高压释放,用于破碎培养细胞株和淋巴细胞
超声波破碎法:注意温度和时间,多用于微生物细胞
③化学破碎法:常用试剂:甲苯、丙酮、氯仿等脂溶性有机溶剂或Triton、Tween等非离子表面活性剂
原理:脂溶性溶剂或表面活性剂将细胞壁细胞膜的结构部分溶解,进而使细胞释放出各种酶类等物质,并导致整个细胞破碎。低温进行防止酶变性失活
④酶促破碎法:自溶法:利用细胞本身酶系,取决于温度、pH值和离子强度。需加少量防腐剂
外加酶:降解细菌细胞壁随之因渗透压差引起细胞膜破裂(注意点:低渗或等渗介质中进行,减少细胞器损伤)

利用一种溶剂对不同物质溶解度差异,从混合物中分离一种或几种组分的过程称为提取/萃取或抽提
抽提液条件:对有效成分溶解度大,破坏作用晓;对杂质不溶