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一种快速制备甲胎蛋白单克隆抗体杂交瘤细胞系的方法技术与方法丁宁,石心泉,郭永,张瑶楠,邹检平目的建立一种快速制备甲胎蛋白单克隆抗体—咏涣鱿赴档姆椒ā种方式同时免疫蹷痗小鼠,取小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞融合并行次黄嘌呤、氨基蝶呤与胸苷选择性培养。用间接酶链免疫吸附试验法秆⊙粜钥寺≈辏⒔⑾赴怠,,篢築痗疧甌狹狹甌痡..—...生殖医学杂志月第卷第【摘要】方法以常规和改良两结果在较短时间内,改良法能获得高效价的免疫抗体,与常规免疫法相比有极显著差异.,同时改良法的细胞融合率和抗体阳性率也显著高于常规免疫法.。筛选获得的高效分泌抗人狹难粜栽咏涣鱿赴榻辛顺醪郊ā结论新的改良方法优化了常规的制备中动物免疫程序,并能成功筛选出狹咏涣鱿赴怠【关键词】甲胎蛋白;杂交瘤;单克隆抗体猣猶,,猲,猵興行琋..甌.—。篢甌篢篈—籋;胰丝诩粕蒲Ъ际跹芯克诜置谑遥本【收稿日期】弧净馗慈掌【基金项目】国家人计生委科学技术研究所中央级公益性科研院所基本科研业务费专项【作者简介】丁宁,女,内蒙古人,硕士,助理研究员,从事生物化学、’通讯作者·,
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甲胎蛋白且恢痔ザ匾煨蕴堑鞍祝子量约,道尔顿谂咛ジ卧嗪吐黄囊中合成,正常人血中含量甚微。年有人首次报道开放性神经管畸形胎儿、羊水中有高水平的H籼ザ蛩蠥’值高于均值常见于患无脑儿或脊柱裂的胎儿,亦见于其他多种畸形,如先天性肾病、食道或肠闭锁、囊性水瘤、骶尾部畸胎瘤、血型不和、先天愚型、先天性性腺发育不全等∽年发现母体血清降慕档陀胩剖献酆征有密切关系一。。因此制备高效特异的タ隆抗体具有重要的意义。在的研制过程中,动物免疫是制备过程中的关键步骤。但是传统动物免疫方式通常需要二个月左右,不但耗时长,而且抗原消耗的量大、对抗原纯度要求高。本实验试图通过优化传统免疫小鼠的方法,大大缩短动物免疫时间并减少了抗原的消耗量,为进一步组装患者肿瘤组织及血清中郊觳獾氖约梁写蛳铝己玫幕。A俅研究、肿瘤的诊治提供更为有效的。摺一、材料鹤陨虾A斐惫尽/撬枇鱿赴锌圃荷虾O赴。芰銪痗小鼠谒木酱笱笛槎机分为两组,每组唬直鹈号和第一组号和第二组5谝蛔榘闯9婷庖叻法进行免疫一⋯,第二组采用改良的免疫方法进行免疫。免疫前静脉采集少量血液,析出血清作为后续检测的阴性对照血清。第一组:肚与等量福氏完全佐剂,美国旌希浞秩榛笞⑷~周龄/∈蟾骨唬周后用同量抗原加不完全福氏佐剂,美国骨蛔⑸洌周后用同量抗原加不完全福氏佐剂腹腔注射,融合前鞲骨蛔⑸加强免疫。第二组:取“肚庖咦艏北京康碧生物科技有限公司焖混匀后,注射于芰涞腂痗小鼠腹腔,完成初次免疫;芎笠痷坏募亮坑眑免疫佐剂快速混匀后注射小鼠腹腔加强免疫,融合前鞲骨蛔⑸浼忧棵庖摺浣用噶疵庖呶绞匝榉。测定血清的抗体效价:将抗血清,倍系列稀释后,用间接。ń锌固宓募觳猓捎副暌,美国舛ǎ卸ū曜嘉#貉品孔#阴性对照孑矧,一空白孔。,≥钡目固宓淖畲笙∈投茸魑?寡G宓目固效价一¨。赴诤希喊闯9嬖咏涣黾际酰妹庖咝∈脾细胞和痮瘤细胞行融合咏涣鱿赴纳秆『涂寺』河眉浣覧法检测杂交瘤细胞培养上清中的,从检测阳性的瘤细胞中挑选生长快,分泌抗体效价高,形态良好细胞株,用有限稀释法一连续克隆次,直至细胞建株。瓵—的效价评估:用间接。测定杂交瘤细胞培养上清和小鼠腹水中的甅奈榷ㄐ裕阂訣试验观察腹水和纯化在不同保存条件下的活性。咏涣鱿赴旧骞