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一例供精人工授精反复失败的精子蛋白质组学分析李志广,卢文红亮,梁小薇苌平,于和鸣锐慈猦目的分析┚斯な诰反复失败捐献者精子的蛋白质组成差异,探讨精子蛋白质组学变化与妊娠个芷谑О艿木柘渍咦魑J笛樽椋籄成功率在%以上的柘渍咦魑6哉组。收集两组精液样品,每位志愿者取菥海看稳【敖~,提取精子全蛋白,应用双向凝胶电泳分离精子蛋白,并行猅/卜质谱鉴定。结果实验组在分析区域内检测到龅鞍椎悖哉兆橛个蛋白点,两组中质谱;琙—瑈【,—瓸,篢篠%.,痡..—...生殖医学杂志年碌淼期【摘要】结局的相关性。方法共有銎ヅ涞鞍椎悖ヅ渎蚀ァ<觳獾霾钜斓鞍椎悖渲惺笛樽橛龅鞍椎愀弑泶铮个蛋白点低表达,在对照组中龅鞍椎闶侨笔У摹结论本研究利用蛋白质组学技术研究了鼳反复失败供精者的精子蛋白质表达差异,发现个差异蛋白点,其生物学意义有待进一步的研究。【关键词】双向凝胶电泳;精子蛋白;蛋白质组学猤琇琗琇—..猟籇甌甌.,瑆甌篢籇甌迦掌凇—;【修回日期】.北京协和医学院研究生院,北京;胰薞粕蒲Ъ际跹芯克本【基金项目】中央级公益性科研院所基本科研业务费专项【作者简介】李志广,男,河北邢台人,硕士生,·
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不育症在全球范围内呈增多趋势,男性不育症患者中约%为无精子症P枰2捎霉┚斯授精瘟频幕颊咭览涤谌死嗑涌馓峁┑挠质精液。虽然冷冻一复苏会对精子活力、形态、完整性产生负面影响心抢涠骋桓此詹⒉幌灾响精子的授精能力。目前人类精子库主要通过精液常规、复苏率等指标评估精液质量,不能全面反映出精子功能与授精能力,一些质量合格的精液样品最终并不能获得妊娠,其中的复杂机制目前不甚清楚。蛋白质组学技术是客观的、不预设研究结果的一种研究方法,为生殖医学提供了崭新思路。。本研究利用双向凝胶电泳分离技术和猅/狹势准ḿ际酰例锤词О艿木献者精子标本进行蛋白组表达差异的分析,探究某些差异表达的蛋白质与精子功能和授精能力之间的潜在相关关系。材料和方法一、标本收集鼳连续失败鲋芷诘木杈咦魑J笛组;鼳周期中成功率在%以上的捐精者作为对照组。所有捐精志愿者满足精子库要求,年龄在~周岁,身体健康并排除遗传性疾病。精液质量均达到当前精子库志愿者精液检查入选合格标准:禁欲阂夯奔洹毫≥,精子浓度≥×觯痬哟婊盥≥%,前向运动精子≥%,精子正常形态率≥%,冷冻复苏率≥%,外供冷冻复苏后前向运动精子≥%,每份精液中前向运动精子总数≥×觥1狙芯烤胰丝诩粕蒲Ъ术研究所人类精子库伦理委员会的审批,所有志愿者签订书面知情同意书。每位志愿者采集菥液。观察案例、对照案例例撼9婕觳橛锌比性;、方法颖瓯局票福液单层法ň子与其他细胞及碎片分开,精子置于全蛋白提取试剂盒,美国试剂中,℃洗涤危詈笠淮渭剖肿约个精子/管胄娜ド锨澹娲⒋妗尤ǖ鞍滋崛〖俺闻ㄋ酰喝ǖ鞍滋崛∈剂盒中试剂和试剂混匀,加入约拦,室温裂解胬胄,将上清移至新管。采用籇约梁拦进行除盐并浓缩,一。4姹赣茫们溶胀液孕信渲疲疞尿素、疞硫脲、,美国⒑哿夸宸永丁~非线性%等电聚焦电泳撼逡,美国/魉仗谴慈堋鞍着ǘ炔舛ǎ翰捎肂╗械鞍浓度测定。蚰旱缬荆喝拥鞍准尤苷鸵至頻,加入电泳槽,使用非线性禾,美国鹊缇劢挂拦,按照下列参数进行等电聚焦:,各>劢购蟮慕禾跸群笤诤%以及含%碘乙酰胺胶庖褐懈髌胶浦聚丙烯酰胺凝胶上进行第二向电泳分离。以恒定电压模式电泳