文档介绍：淋巴细胞标志和功能的检测    nbsp;人体内的淋巴细胞分为T细胞、B细胞和包括NK细胞为代表的第三群细胞,下分若干亚群,各有其特异的表面标志和功能,据此建立许多相应的检测方法。临床上各种类型的免疫缺陷症、自身免疫病以及肿瘤等均可出现不同群淋巴细胞数量和功能的变化。因此计数外周          人体内的淋巴细胞分为T细胞、B细胞和包括NK细胞为代表的第三群细胞,下分若干亚群,各有其特异的表面标志和功能,据此建立许多相应的检测方法。临床上各种类型的免疫缺陷症、自身免疫病以及肿瘤等均可出现不同群淋巴细胞数量和功能的变化。因此计数外周血和组织内淋巴细胞及其亚群的数目或比例,以及它们所显示的功能强弱,可藉此判断机体的细胞免疫水平,对临床认识疾病,探讨其发病机制、观察病情、判断预后、考核疗效以及防治疾病等方面可提供极为有用的信息。第一节 T细胞表面标志的检测一、特异性抗原的检测检测人T细胞的特异性抗原,曾采用抗人脑、抗人胸腺细胞和抗人T细胞等抗血清,通过细胞毒试验或免疫荧光染色加以鉴定。自抗白细胞分化抗原的单克隆抗体问世以来,上述诸多方法均被新方法取而代之。常用以鉴定和检测计数T细胞的表面分化抗原如表21-1所示。表21-1T胞表面主要CD抗原及其特异性    CD抗原特异性    CD2E受体、全部T细胞和部分NK细胞    CD3成熟T细胞    CD4T(辅助/诱导)细胞、Mφ、HIV受体    CD8T(杀伤/抑制)细胞、NK细胞的亚型    CD25活化T细胞、IL-2受体用单克隆抗体检测T细胞表面抗原的方法有两大类,一类是用标记抗体着染,如免疫荧光法、酶免疫法、生物素-亲和素(或链霉亲和素)系统的ABC法以及免疫金银染色法;另一类是用抗体致敏的红细胞作花环试验。两类方法各有优缺点。以下叙述有代表性的方法。(一)间接免疫荧光法本法是将分离获得的外周血单个核细胞分别与抗相应CD的单克隆抗体(如CD2、CD4、CD8)结合后,洗去游离的抗体,继加荧光素标记的抗小鼠IgG抗血清,经温育结合后,洗去多余的标记抗体,取样制片,用荧光显微镜观察并计数约200个单个核细胞,以荧光阳性细胞与计数细胞总数之比,求得相应CD抗原阳性的T百分率。如有条件,细胞经荧光标记抗体着染后,用流式细胞仪计数,快速而准确,但需要较多的投资,难以普及应用。(二)免疫细胞化学法通常用酶免疫检测法,如APAAP酶免疫桥联法。为减少非特异性着染,可选用生物素-链霉亲和素系统试剂作ABC法染色。该类方法可用普通显微镜观察,凡呈棕黄色的细胞为相应CD抗原阳性细胞,计其占总淋巴细胞的百分率。本法简便易行,不需特殊仪器,一般试验室均可采用。(三)抗体致敏细胞花环法用相应的CD单克隆抗体致敏醛化的红细胞作为指示物,它与受检的细胞混匀后,置室温片刻,继经低速离心,移放室温作短期温育或4℃过夜后,重悬取样涂片染色镜检。凡受检细胞周围粘附有3个或更多红细胞的判为花环形成细胞,共计数100~200个细胞,以花环形成数与计数细胞总数之比为相应CD抗原阳性细胞的百分率。本法需有相应的致敏红细胞试剂,受影响