文档介绍：生物化学与生物物理进展
ProgressinBiochemistryandBiophysics
2009,36(12):1544~1552
出芽酵母 haromycescerevisiae 转录抑制因子
Rdr1 负调控细胞胁迫应答*
苗敏曹红平钟彦刘军王一慧刘昕张年辉刘科**
(四川大学生命科学学院生物资源与生态环境教育部重点实验室,成都 610064)
摘要 Rdr1 是出芽酵母 haromycescerevisiae 的一个转录抑制因子,参与控制细胞的多重药物耐受性,并可能与细胞胁迫
应答相关. 利用 PCR 方法扩增 RDR1 基因片段,将其克隆至高拷贝表达载体 pYES2/NTA 上并诱导 Rdr1 蛋白在酵母细胞中
过表达. 为了揭示转录抑制因子 Rdr1 在胁迫应答中的作用,比较了 RDR1 过表达细胞、RDR1 缺失突变体细胞和野生型细
胞在过氧化氢处理、热胁迫和高盐处理条件下的生长状态,结果显示,RDR1 过表达导致细胞对上述 3 种胁迫作用更敏感,
而 RDR1 缺失则使细胞对这些胁迫作用的耐受性不受影响或有一定增强. 为了揭示上述不同细胞在胁迫条件下生长状态的差
异与细胞内抗氧化酶活性之间的关系,测定并比较了 RDR1 过表达细胞、RDR1 缺失突变体细胞和野生型细胞中超氧化物岐
化酶(superoxidedismutaseSOD)、过氧化氢酶、葡萄糖-6- 磷酸脱氢酶(glucose-6-phosphatedehydrogenaseG6PDH)、谷胱甘肽
还原酶(glutathionereductaseGR)的活性. 结果表明,RDR1 缺失突变体细胞具高活性的 SOD、过氧化氢酶、G6PDH 和 GR,
而 Rdr1 过表达细胞中 SOD、过氧化氢酶、G6PDH 和 GR 对 SOD 和过氧化氢酶活性的影响要大于
G6PDH 和 GR. 细胞抗氧化酶活性的变化初步揭示,RDR1 过表达细胞对胁迫的敏感和 RDR1 缺失突变体细胞对胁迫耐受性
增加的原因. 为转录抑制因子 Rdr1 在胁迫应答中的负调控作用及其机理提供了初步的遗传学和生物化学证据.
关键词 Rdr1,转录因子,胁迫应答,抗氧化酶
学科分类号 Q81 DOI: .
出芽酵母 haromycescerevisiae 作为单细胞养基中生长[3],RDR1 缺失后,与细胞耐药性相关
真核模式生物与哺乳动物细胞在大分子水平上和细基因的表达量增加了 2 倍以上,细胞对药物的抗性
胞器水平上有惊人的相似性,并且很多酵母蛋白与增加[4]. 最近对 FLO11 的研究发现,通过表形筛选
高度同源的人类蛋白之间表现出功能上的互换性. 出的 25 个受转座子插入影响的基因,然而在这些
对酵母细胞信号传导及基因表达调控的研究有助基因被定向敲除后,有 9 个基因并未表现出应有的
于深入了解真核细胞生命活动的基本规律和分子表型,其中包括 RDR1 基因,这表明 RDR1 功能的
机制. 复杂性[5].
酵母细胞转录抑制因子 Rdr1 由 546 个氨基酸通过微阵列分析酵母 mRNA 在不同条件下的