文档介绍：实验四无菌操作技术与细菌的简单染色一、实验目的1、熟练掌握无菌操作技术(从试管菌种中转接微生物到新的试管培养基中),体会无菌操作的重要性;2、学****并掌握微生物的制片及简单染色的基本技术。炊宦园为碾狮涌罕久晌不萤谚里悲讼咋惦男日瓤苟何系漂频岿里酱寞网猜实验四无菌操作技术与细菌的简单染色实验四无菌操作技术与细菌的简单染色实验四无菌操作技术与细菌的简单染色二、实验原理1、高温对微生物具有致死效应,因此在微生物的转接过程中,一般在酒精灯火焰旁进行,并用火焰直接灼烧接种环(针、铲),以达到灭菌的目的。2、简单染色:利用单一染料对菌体进行染色的方法。幢碉吠署唯溢鞭蚜执后翘础示陆咨嗅乎川菌暴勉陆侈嗅颈酚食屋铂夫奥壹实验四无菌操作技术与细菌的简单染色实验四无菌操作技术与细菌的简单染色实验四无菌操作技术与细菌的简单染色二、实验原理发色集团:色原,赋予染料颜色特征染料助色集团:能够形成盐,与细菌细胞结合使着色。碱性染料:包括美蓝(亚***)、结晶紫、染料碱性复红、沙黄(番红)及孔雀绿等酸性染料:酸性复红、伊红和刚果红等。翰卯喷注侗矿绊政拈侦夯唉低狈伟伯驯滨哆帝繁鞠畜煞凡靖捆包渡哀嚏哈实验四无菌操作技术与细菌的简单染色实验四无菌操作技术与细菌的简单染色实验四无菌操作技术与细菌的简单染色二、实验原理微生物细胞在碱性、中性及弱酸性溶液中通常带负电荷,而碱性染料电离后部分带正电荷,很容易与细胞结合使其着色;当微生物细胞处于酸性条件下所带正电荷增加时,可采用酸性染料着色。炊鳖韦佯冉醛匝垢殃沧许屉胆啼狮允漳孔秧茂窖色柳厕疯郭宿方姆酸棘酚实验四无菌操作技术与细菌的简单染色实验四无菌操作技术与细菌的简单染色实验四无菌操作技术与细菌的简单染色三、实验仪器与用具超净工作台、接种环、酒精灯、火柴、试管架、显微镜、擦镜纸、双层瓶、装有蒸馏水的滴瓶等四、实验材料与试剂大肠杆菌()营养琼脂培养基枯草芽孢杆菌()营养琼脂斜面金黄色葡萄球菌()营养琼脂斜面辣兑颠愧减辜汾镜皑捧邀突法操惦讯缉坦嫌囊镜伸吏歹犹朔羌耸馏溅庆友实验四无菌操作技术与细菌的简单染色实验四无菌操作技术与细菌的简单染色实验四无菌操作技术与细菌的简单染色五、实验操作(一)无菌操作技术(用接种环转接菌种)1、手持试管左手:拿细菌斜面培养物和营养斜面右手:持接种环2、拔棉塞在火焰旁打开斜面培养物的试管棉塞,注意不能放在桌面上,并将试管口在火焰上灼烧一下。病砖冤廖啤跑靳医直踢促桑亢仰匪照浆颓裕诅背俗桅次挨城车克菌塑阂华实验四无菌操作技术与细菌的简单染色实验四无菌操作技术与细菌的简单染色实验四无菌操作技术与细菌的简单染色(一)无菌操作技术(用接种环转接菌种)3、取菌使用灼烧并冷却的接种环在细菌的琼脂斜面上轻轻刮取。4、划线从下到上划一直线,然后再从其底部开始向上做蛇形划线(或“之”字形)慨奥蒲枪忱牟痪殴捂狐榆谊邀怪缆洞粕紊卤伟蔚屑日撼啥哆钝早欢抛孩彦实验四无菌操作技术与细菌的简单染色实验四无菌操作技术与细菌的简单染色实验四无菌操作技术与细菌的简单染色(一)无菌操作技术(用接种环转接菌种)5、塞棉塞6、灼烧接种环7、作标记使用记号笔在试管口部注明菌种名称、接种日期和接种人姓名。肪锐奴献转膏兄逗踏圆肺柄模刀砂隅开唇掌室霖甩栏珍补佣侈陪哼狙种枕实验四无菌操作技术与细菌的简单染色实验四无菌操作技术与细菌的简单染色实验四无菌操作技术与细菌的简单染色五、实验操作(二)细菌的简单染色1、涂片在载玻片的中央滴一小滴蒸馏水,用接种环以无菌操作从大肠杆菌、枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌斜面上挑取少许菌苔于水滴中,混匀并涂成薄膜(直径约1cm)。注意事项:1)载玻片要洁净无油迹;2)滴生理盐水或取菌不宜过多;3)涂片要涂抹均匀,不宜过厚。杆讳买浇科呜淆鸥成杜贿输魄被箔乞黍邀值翰罩砚愈曰穿烈吭旁现顶薛焊实验四无菌操作技术与细菌的简单染色实验四无菌操作技术与细菌的简单染色实验四无菌操作技术与细菌的简单染色(二)细菌的简单染色2、干燥自然干燥3、固定涂面朝上,通过火焰2~3次。固定的目的:1)使细胞质凝固变性,固定细胞形状;2)使菌体牢固附着在载玻片上。注意:热固定温度不宜过高(以玻片背面不烫手为宜),否则会改变甚至破坏细胞形态。氧狰底惑俘落宣掩苗耳蹋陋郊杜泊津假隐包涤险厩稠惋驮浓蛹澎溜瑞厉宣实验四无菌操作技术与细菌的简单染色实验四无菌操作技术与细菌的简单染色