文档介绍：◆凝固全血基因组DNA提取系统◆目录号1431◆使用手册◆实验室使用,仅用于体外v试剂盒组成、储存、稳定性:保存室温室温-20℃-20℃160次×50(143101)×50(143102)(可选)20mg/ml本试剂盒在室温储存18个月不影响使用效果。储存事项:,可在37℃水浴加热几分钟,即可恢复澄清,不要剧烈摇晃,以免形成过量的泡沫。、方便运输,提供蛋白酶K为冻干粉状,收到后,可短暂离心后,,因为反复冻融可能会降低酶活性,因此溶解后立即按照每次适合使用量分装冻存,-20℃保存。、氧化、pH值变化,各溶液使用后应及时盖紧盖子。v产品介绍:本试剂盒根据凝固全血特点独家研制的细胞核裂解液配合蛋白酶K裂解凝固血块释放出基因组DNA,然后蛋白沉淀液选择性沉淀去除蛋白,最后纯净的基因组DNA在Sigma的分子生物学级Glycogen的助沉下通过异丙醇沉淀并重溶解于DNA溶解液。:不需要使用有毒的苯酚等试剂。快速,简捷,单个样品操作一般可在1小时内完成。-1-,配合|Sigma的分子生物学级Glycogen帮助沉淀微量DNA,产量高,OD260/~,长度可达50Kb-150kb,可直接用于构建文库、PCR、Southern-blot和各种酶切反应。:所有的离心步骤均在室温完成,使用转速可以达到2,500xg,并配备容纳50ml离心管转头的传统台式离心机(小量提取,用小离心机即可)。%乙醇和TE缓冲液。典型的凝固血产量1ml全血可提取出10-30µg基因组DNA(不同凝固程度的样品产量的个体差异可能非常大)。,可以很容易的按照比例扩大或者缩小每次处理的全血量(20µl-10ml)。对于每个样品提取血量大或者用量大的客户,可以和我们联系,我们另有专门准备有优惠的大包装试剂。:(以处理■50μl和◆1ml凝固全血举例)加入■◆1ml凝固血液至一个50ml离心管,剧烈涡旋或者用手剧烈拍打离心管帮助打散凝血块。■550μl或◆11ml细胞核裂解液,吹打混匀,再加入■3μl或◆60μl蛋白酶K(20mg/ml),颠倒混匀25次。℃放置3小时至过夜,直到所有的凝块完全融解。可选步骤(一般不需要做):加入■3μl或◆60μlRNaseA(4mg/ml),在裂解物中加入RNaseA(10mg/ml)至终浓度30μg/ml,颠倒25次混匀,37℃温育15分钟去除残留RNA。(可置冰上一分钟)。加入■200μl或◆4ml蛋白沉淀液,在涡旋振荡器上高速连续振荡混匀25秒,混匀后可能见到一些小的蛋白团块。-2-注意液体确实要旋转着振荡起来,而不仅仅是上下振动,这样混匀效果和沉淀蛋白效果最佳。■5分钟或◆10分钟。■13,000-16,000xg离心5分钟或◆2,5