文档介绍：
抗增殖蛋白 Tob1 参与雌激素受体信号通路
的初步研究#
刘畅1,徐加英1,王利利2,焦旸1**
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(1. 苏州大学医学部放射医学与防护学院,苏州 215123;
2. 苏州大学附属第一医院放疗科,苏州 215006)
摘要:目的:探讨抗增殖蛋白 Tob1 抑制乳腺癌细胞增殖的具体信号通路。方法:采用自行
构建的 Tob1 全长和 LXXLL 模序缺失、突变体的原核、真核表达载体,经脂质体介导转染
乳腺癌细胞。经 GST 捕获法和免疫共沉淀法确定 Tob1 与 ERα之间的相互作用。采用荧光
素酶报告基因法检测 Tob1 蛋白对 ERα及其通路下游关键效应分子 Cyclin D1 转录活性的影
响。结果:Tob1 与 ERα存在相互结合或相互作用:在体外结合实验中,含 btg1 结构域及
LXXLL 模序的 Tob1 氨基端(1~139aa)与 ERα存在结合作用;LXXLL 突变型 Tob1 缺失
体(1-139aa)仍可与 ERα发生结合,但结合能力弱于野生型 Tob1。荧光素酶活性测定结
果发现 Tob1 可显著抑制 ER 及其下游基因 Cyclin D1 的转录活性。结论:Tob1 蛋白至少部
分通过 ER 信号通路,在乳腺癌细胞中发挥抗增殖蛋白活性。
关键词:肿瘤;乳腺癌;抗增殖蛋白;Tob1;雌激素受体
中图分类号:
Tumor Suppressor Tob1 Involved in Estrogen Receptor
Signaling Pathway
LIU Chang1, XU Jiaying1, WANG Lili2, Jiao Yang1
(1. School of Radiation Medicine and Protection, Medical college of Soochow University, Suzhou
215123;
2. Department of Radiotherapy, the First affiliation Hospital of Soochow University)
Abstract: Objective: to identify the mechanisms of tumor suppression function of Tob1 in breast
cancer cells. Methods: The binant plasmid of Tob1, truncated Tob1, and LXXLL motif
mutated Tob1 were constructed, transfected into human breast cancer cell lines using
lipofectamine. In vitro GST-pulldown assay and immunoprecipitation assay were utilized to
confirm the interaction between Tob1 and ERα. Luciferase assay was used to detect the
effects of Tob1 on t