文档介绍：流行性出血热实验室检测方法免疫学检测用于EHF急性期病例实验室确诊、血清学核实诊断以及高危人群感染率检测的方法附件1IgM捕捉ELISA法(MacELISA)检测出血热IgM抗体兰州生物制品研究所开发试剂,但无正式批号。-3小时出结果,适用于应急。附件2IgM捕获法胶体金标记试纸条快速检测IgM抗体中国CDC病毒病所开发试剂,但无正式批号。20分钟出结果,适用于应急。附件3免疫荧光法(IFA)检测人血清IgG抗体浙江CDC抗原片,上海生物制品所羊抗人荧光抗体。无正式批号。2小时出结果。附件4酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清IgG抗体兰州生物制品研究所开发试剂,但无正式批号。2小时出结果。2病毒分离附件5VeroE6或Vero细胞分离汉坦病毒分子生物学一般用于MacELISA法或胶体金标记试纸条方法核实诊断阳性的病例的附件6RT-PCR检测汉坦病毒基因及分型4血清分型附件7交叉保护中和实验鼠感染率的检测附件8免疫荧光法检测鼠肺抗原浙江CDC直接荧光抗体。无正式批号。附件9酶联免疫吸附试验(ELISA)双抗原夹心法检测血清总抗体中国CDC病毒病所开发试剂,但无正式批号。参考《全国肾综合征出血热监测方案》附件1IgM捕捉ELISA法(MacELISA)检测出血热IgM抗体本试剂盒系采用抗人μ链捕获人血清IgM抗体,加辣根过氧化物酶-病毒抗原标记物,用以检测出血热特异性IgM抗体。具有较高的敏感性、特异性和重复性。特别适用于出血热的早期特异性诊断及其它实验性研究。本试剂盒为96人份/包装。试验材料:(1)抗人IgM抗体(μ链):(2)冻干阳性血清/冻干阴性血清1支,,工作浓度为1:10;(3)冻干辣根过氧化物酶-病毒抗原标记物1支,,工作浓度为1:20;(4)冻干小牛血清1支,1ml/支;(5)浓缩洗液(10倍浓缩)1瓶,50ml;(标本稀释液为含5%小牛血清原倍洗液);(6)A/B显色液和终止液各1瓶。(冻干试剂先用相应量的去离子水溶解,然后临用前根据所需按工作浓度稀释使用,余下的放-20℃保存)(7)终止液:4NH2SO4(8)酶标仪。检测步骤:(1)将待检血清用稀释液100倍稀释,加入已包被抗人μ链抗体的酶标板一孔中,100μl/孔,同时加入已1:10稀释的阳性血清/阴性血清对照各一孔,100μl/孔,置37℃水浴孵育1小时。(2)弃去血清,用PBS-T漂洗5遍,甩干。(3)将冻干辣根过氧化物酶-病毒抗原标记物1:10稀释后,加入反应板相应孔内,100μl/孔,37℃水浴孵育1小时。(4)弃去酶标抗体,用洗涤液洗涤6次,甩干。(5)加显色液:于各反应孔内加A/B液各一滴,37℃,避光3~5分钟。(6)加终止液(4NH2SO4)于每反应孔,一滴/孔。结果判断:(1)目测方法:阳性对照孔呈明显蓝色,阴性对照孔呈无色,对照成立;若待检血清孔呈明显淡蓝色或深蓝色(TMB),则标本为出血热IgM抗体阳性,反之阴性。(2)酶联免疫检测仪检测:于450nm(TMB)阳性对照孔OD值/阴性对照孔OD值,即P/N≥,对照成立;若待检血清孔OD值与阴性对照孔OD比值≥,则标本为流行性出血热IgM抗体阳性,反之阴性。(,)意义:阳性结果,表明患者新近汉坦病毒感染,用于出血热早期诊断。附件2IgM捕获法胶体金标记试纸条快速检测IgM抗体适用对象:本产品适用于人血清或血浆中出血热病毒IgM抗体的快速检测。检测意义:检测出血热病毒IgM抗体对于早期诊断出血热急性感染有重要指导意义。储存条件和有效期:室温或冰箱(4-30℃)密封保存,有效期18个月。注意事项:,、溶血及污染的的样品有可能导致错误的结果样品收集和保存:采取静脉血于干净未加抗凝剂(若收集血浆则加入抗凝剂)的容器内,静置使血凝固,分离血清备检测,可于4℃冰箱内保存2周;如不能及时检测可将血清置于冰箱内冷冻或冷藏。检测前复温并混匀。避免反复冻融标本。操作步骤:℃冰箱,,取出试剂盒,平放于水平桌面上,-3滴或100ml-150ml样品滴加于测试盒上的样品孔内,于15分钟内观察测试结果结果判断:阳性:可见质控线与实验线2条紫红色带阴性:只有一条质控线出现无效:如果未能观察到质控线出现,则无论是否有实验线显示,均为无效,应重新检测注意:阳性结果最早1~2分钟即可显示出来,但阴性结果必须等到15分钟才可判定。附件3免疫荧光法(IFA)检测人血清I