文档介绍：葡萄糖浓度的测定
考试
实验目的及要求
掌握邻甲苯胺法法测定葡萄糖含量的原理和方法。
学会取液器及紫外分光光度计的使用。
了解葡萄糖浓度测定的意义。
实验仪器及试剂
772型分光光度计;试管;移液管;水浴锅。
邻甲苯胺试剂:,%硼酸100ml,用冰醋酸溶解,在1000ml容量瓶内调至到刻度。
葡萄糖标准贮存液:10mg/ml。
葡萄糖浓度测定的意义
正常人血糖浓度在神经和激素调节下维持相对恒定。当调节因素失去平衡时出现高血糖或低血糖。
病理性高血糖见于胰岛α-细胞瘤等疾病。
病理性低血糖见于胰岛β-细胞瘤、垂体机能减退、肾上腺皮质机能减退、甲状腺机能减退、及肝坏死、糖原累积症等疾病。
测定葡萄糖浓度的方法
Folin-吴宪法: 利用葡萄糖的还原性,在与碱性铜试剂共热时,是铜离子还原成亚铜离子。
邻甲苯胺法:利用醛糖在热醋酸溶液中与苯胺类缩合生成青色的Schiff碱。
葡萄糖氧化酶法:利用葡萄糖氧化酶对葡萄糖的氧化作用。
Folin-吴宪法历史
中国旅美生化和分子生物学家吴宪在美国哈佛大学Otto Folin教授指导下,完成了题为“一个血液分析系统”的博士论文;
Folin与吴宪建立的无蛋白血滤液制备,血糖、非蛋白氮、尿素、肌酐、肌酸等测定方法,奠定了血液化学分析的基础;
其中以“Folin-吴宪法”著称,在1920到1950年间用于世界上许多病人的诊断和治疗的追踪。
Otto Folin
Hsien Wu
Folin-吴宪法原理
葡萄糖的半缩醛羟基具有还原性,在加热条件下可使碱性铜试剂中的Cu2+还原为黄色的氧化亚铜沉淀,而其本身被氧化为羧基。
氧化亚铜可使磷钼酸还原成蓝色的钼蓝,蓝色的深度与葡萄糖的浓度成正比,故可用比色法测定钼蓝的光吸收值来测定葡萄糖的浓度。
葡萄糖氧化酶法原理
醌亚胺在480-550nm范围内有最大吸收峰,且醌亚胺的量与葡萄糖的量成正比,利用比色法测定醌亚胺的量即可计算出血糖的含量。
邻甲苯胺法原理
葡萄糖在热醋酸溶液中脱水后与邻甲苯胺缩合,生成青色的Schiff碱,其颜色深浅与葡萄糖含量成正比,其反应式如下:
葡萄糖标准溶液制备
取10ml容量瓶6只,分别编号①、②、③、④、⑤;
、、、、;
以H2O稀释至10ml,混匀以上葡萄糖标准液浓度分别为50、100、200、300、400mg/100ml。