文档介绍：东北林业大学博士学位论文蓝靛果花色苷酰基化菌种选育及衍生物结构与功能的研究姓名:张智申请学位级别:博士专业:森林植物资源学指导教师:王振宇201106摘要II;Y2026843:摘要蓝靛果(LoniceraedulisTurcz)在植物分类学上属忍冬科(Caprifoliaceae)忍冬属(LoniceraL.)。经临床试验证明,对心脑血管疾病有一定疗效,并具有抗病毒、抗肿瘤、肝脏解毒等功能。蓝靛果花色苷属于多酚类衍生物中的花青素类,它被广泛应用于食品、饮料、化妆品当中,具有较高的营养和药用价值。但天然蓝靛果花色苷稳定性较差,受光照、温度、pH等环境因素影响比较大。如果天然花色苷的糖基被酰基化,则会形成稳定的“三明治”结构。本论文旨在通过微生物转化,改变花色苷结构进而增强其稳定性和生物活性功能,从而扩大它的应用范围和领域。通过以下试验得到了一条可使天然花色苷稳定性明显增强的生物转化途径。(1)通过对收集的132株菌种的筛选,得到可增加蓝靛果花色苷稳定性的菌种两株,经分子生物学鉴定分别为:;分别对其理化复合诱变,,—B105的遗传性状稳定(2),分别进行了添加芳香族、脂肪族等酸类、常见金属离子和部分氨基酸等作为辅色素,用以增强花色苷保存率的研究。结果表明,,,且在连续高温光照6d后,%,%,加入对羟基苯甲酸保存率提高了1..8倍。但针对SX-1160的生物转化过程没有找到合适的酰化供体。(3)采用PER技术从8aciIlussubtilisLD—B105中扩增获得花色苷酰基化过程中的关键酶一酰***连接酶的基因,命名为acyB、acyC、acyA。PCR扩增共获得大小为1646bp的两段基因片段。其中一段为acyB,序列长l182bp,包含一个完整的基因开放阅读框,共编码393个氨基酸;另一段acyC序列,序列长为446bp:acyA全长1152bp,编码383个氨基酸。将acyA、acyB和acyC基因克隆到pMDl9一T载体上,经蓝白斑筛选和酶切鉴定选择阳性克隆进行测序分析,并推导出氨基酸序列,进行了生物信息学分析。(4)通过优化生物转化条件:%、%、%、、pH5的培养基中,,35"(2,llOrpm,转化72h:转化后将发酵液4000rpm离心30rain,取上清液,50℃光照6d,测定吸光值。结果显示:%,%,转化后的保存率是未转化的2倍。(5)***,,用40%、60%乙醇洗脱,分离得到花色苷衍生物。(%)进行紫外、红外和1H-NMR、‘3C-NMR核磁扫描,结合化学分析方法,初步确认:P4们为蓝靛果花色苷与对羟基苯甲酸的酰基化衍生物—。(6)分别对花色苷衍生物P40_2、P40-3、P40..4、,试验包括时间、光照、温度、金属离子、氧化剂、还原剂、糖类、酸类和部分食品添加剂。试验结果表明:转化的花色苷衍生物P40-2具有较强的稳定性。(7),试验包括总抗氧化能力、总还原能力、清除DPPH自由基、清除超氧阴离子自由基、清除过氧化氢自由基和抗脂质过氧化能力。试验结果表明:。关键词蓝靛果花色苷;微生物转化;基因测序;分离纯化;结构分析;稳定性;,