文档介绍：还原糖和总糖的测定可溶性还原糖和总糖的测定河南宏翔生物科技有限公司河南省多功能生物蛋白工程技术研究中心1目的建立统一的发酵液中还原糖和总糖的定性检测方法,确保检验方法的一致性、科学性和准确性2范围适用于微生物中心实验室实验、***基、具有还原性的糖类。黄色的3,5-二硝基水杨酸(DNS)试剂与还原糖在碱性条件下共热后,自身被还原为棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。在一1定范围内,反应液里棕红色的深浅与还原糖的含量成正比,在波长为540nm处测定溶液的吸光度,查对标准曲线并计算,便可求得样品中还原糖的含量。不具还原性的部分双糖或多糖经酸水解后可彻底分解为具有还原性的单糖。通过对样品中的总糖进行酸水解,测定水解后还原糖含量,可计算出样品的含量含量。由于多糖水解为单糖时,每断裂一个糖苷键需加入一分子水,。、电热恒温水浴锅、试管及试管架、容量瓶、移液器、量筒。?烘至恒重的分析纯葡萄糖100mg,置于小烧杯中,加少量蒸馏水溶解后,转移到100ml容量瓶中,用蒸馏水定容至100ml,混匀,4?冰箱中保存备用。(3,5-二硝基水杨酸),加到500ml含有185g酒石酸钾钠的热水溶液中,再加5g重蒸酚和5g亚硫酸钠,搅拌溶解,冷却后加蒸馏水定容至1000ml,贮于棕色瓶中,7-10天后使用。还原糖和总糖的测定—3,5-,按表1分别加入浓度为1mg/ml的葡萄糖标准液、蒸馏水和DNS试剂,配成不同浓度的葡萄糖反应液。表1葡萄糖标准曲线制作将以上溶液,封口置沸水浴煮5min,冷浴冷却,定容至25mL,以0号管为对照,在540nm下测定吸光值,以葡萄糖质量为Y轴,吸光值为X轴,拟合曲线。标准曲线为::,放入100mL烧杯中,先用少量蒸馏水调成糊状,然后补足至50ml蒸馏水,搅匀,煮沸5min,使还原糖浸出。将浸出液(含沉淀)转移到50mL离心管中,于4000r/min离心5min,沉淀可用20mL蒸馏水洗一次,再离心,将两次离心的上清液收集在100mL容量瓶中,用蒸馏水定容至刻度,混匀,即为稀释100倍的还原糖待测液(实际操作时可根据需要稀释至适当倍数:10、20、30、40、50、100、200等)。3生产发酵罐菌液检测样品的制备:按照发酵罐取样的操作规程取样,并用洁净的三角瓶盛放。取一定体积的发酵液在4000-12000rpm下离心去除去菌体。准确量取5ml发酵上清液(视含糖量高低而定,在发酵周期内不同时期取样数量应有所不同)于100ml容量瓶中,加入10ml10%ZnSO4溶液,用碱液(NaOH3mol/L)调节显碱性,以水稀释至刻度、摇匀;通过干燥滤纸过滤,即为稀释20倍的还原糖待测液。(实际操作时可根据需要稀释至适当倍数:10、20、30、40、50、100、200等)。实