文档介绍：【实验原理】叶绿体色素又称光合色素,在高等植物中可分为叶绿素和类胡萝卜素两大类,前者包括叶绿素a(蓝绿色)和叶绿素b(黄绿色),后者包括胡萝卜素(橙色)和叶黄素(黄色),它们与类囊体膜上的蛋白质结合形成色素蛋白复合体,不溶于水,易溶于酯,因此可用***、乙醇、石油醚等有机溶剂进行提取。叶绿体色素的分离有多种方法,本实验仅介绍纸层析法。层析的基本原理:在分离过程中,由一种流动相(即一种液体或气体)带动着试样经过固定相(一种支持物,如纸)向外扩散,由于试样在两相中的溶解度不同和固定相对试样中不同成分的吸附程度有别,当用适当的溶剂推动时,混合物中各成分在两相间具有不同的分配系数,所以它们的移动速度不同,经过一定时间层析后,可使试样中的各种组分得到分离,在做纸层析时,由于纸对光合色素中各种色素分子的吸附程度不同,以及这些色素分子在溶剂四***化碳(推进剂)中溶解度也有差异,以致溶剂带动色素分子向四周移动时,各种色素分子沿纸扩散的速度也就不同,使混合色素分离,出现不同颜色的环。将提取的叶绿素溶液置于光下,在透射光呈绿色,在反射光下呈樱桃红色,这种现象称为荧光现象。在反射光下叶绿素溶液之所以呈樱桃红色,是因为叶绿色分子吸收光能后处于激发状态,激发态的叶绿素分子很不稳定,当它回到基态时,将所获得的能量以辐射能的形式发射出红光量子。叶绿素的化学性质很不稳定,容易受强光、高温等的破坏,特别是当叶绿素与蛋白质分离以后,破坏更快,而类胡萝卜素则较稳定。叶绿素中的镁可以被H+所取代而成褐色的去镁叶绿素,后者遇铜后,其中的氢(H+)又被铜(Cu2+)取代,形成了铜代叶绿素,便由褐色转变成蓝绿色,铜代叶绿素很稳定,且比原来的绿色还要稳定些,在光下也不易被破坏。【材料、设备与试剂】。、研钵、烧杯、量筒、培养皿、刻度试管、试管夹、试管架、酒精灯、剪刀、圆形滤纸、小漏斗等。***、四***化碳、无水硫酸钠、6?mol/L盐酸、醋酸铜粉末、碳酸钙等。【方法与步骤】?g,洗净,擦干,去掉主脉后剪碎,放入研钵中。-5?mL***后,研磨成匀浆,研磨过程中根据情况加入一定量的***以利于研磨,匀浆用多层纱布过滤到试管中。~5?mL***,研磨过滤,共得深绿色溶液近10?mL,其中含有叶绿素a、叶绿素b、叶黄素、胡萝卜素等色素及其它脂溶性物质。。具体操作为:(2?cm×4?cm)沿长度方向卷成一个紧实的纸芯。(直径11?cm,略大于培养皿直径),在其中心位置钻一个纸芯粗度的圆形小孔(滤纸不能折叠),将卷好的纸芯一端插入孔内少许,并剪去纸芯上端多余部分,使纸芯上端与滤纸恰好平齐,?cm(与培养皿盖高度同)。,平放在干净的培养皿上,用细玻璃滴管吸取少量叶绿体色素的***提取液,小心地滴入纸芯上端7-10滴。注意:一定要在色素斑点稍风干后,再滴入另一滴,而且液滴不能污染滤纸。(约为培养皿高度的1/3左右)四***化碳,并加入一勺(适量)的无水硫酸钠,使纸芯下端浸入其中,