文档介绍：组织石蜡包埋和切片技术包埋剂embeddingagent在制作切片或超薄切片时,由于组织是柔软的,或局部的软硬不均,这样制作厚薄均匀的切片是困难的。所以有必要用一定物质浸透组织内部,整个组织一样硬化,以利于切成薄片,这种物质叫做包埋剂。一股用光学显微镜观察的切片,用石蜡、火棉胶、炭蜡、明胶等作包埋剂;电子显微镜则用环氧树脂、聚苯乙烯树脂、异丁烯树脂及水溶性树脂。石蜡制片法是将材料经固定、脱水、透明、浸蜡后包埋在石蜡里面进行切片的方法。此法适用范围,制片手段完备,能将材料切成极薄的片子(可切至2-8微米左右),并能制成连续的片子,这是其它制片法难以达到的,因此在光学显微镜的制片技术上它是最常用的一种方法。除了一些经不住石蜡切片法中所应用的各种药剂处理的材料不能应用石蜡切片以外,一般的材料都可以用此法制片,但有制作时间较长,操作过程复杂以及材料易发硬或发脆等缺点。该法多采用旋转式切片机进行切片。石蜡制片操作程序如下:(一)材料的采集与分割采集材料应根据制片的目的和要求而定,材料要有代表性,无病虫害或其它损伤,如要观察病理解剖,则要取病斑、病症部位。采下的材料应立即放在标本箱或湿布包起来带回实验室进行分割固定(如有条件也可在试验地采集后进行分割固定)。为使固定液能迅速的渗透材料,材料要进行分割。分割时动作要迅速,以防材料萎蔫。分割块的大小,宜小不宜大,一般不超过1cm3,分割后立即杀死固定。(二)杀死与固定利用药剂迅速把细胞杀死,以保持材料本来的状态和结构。、卡诺固定液等。将固定液放在具塞小瓶中,投入材料,盖好瓶盖。,时间至少24小时。,也是保存剂,因此材料可长期保存在固定液中备用。卡诺固定液穿透力强,固定较小材料一般1~6小时即可,最多不超过24小时。因卡诺固定液不能做保存剂,所以固定后要用95%、85%酒精浸洗,每级约20min.,然后保存在70%的酒精中备用。(三)脱水脱水的目的是除去组织中的水分,便于透明、浸蜡、包埋等步骤的进行,因为这些程序中所用的药品都不能与水混合,所以必须脱水。常用的脱水剂为酒精。脱水过程应缓慢进行,不能操之过急或时间过长,以免组织变硬变脆或发生收缩现象。脱水采用等级脱水(系列脱水),即从较低浓度酒精开始,逐渐替换到高浓度酒精。一般为:50%→70%→80%→95%(此时可加少许番红,使组织着色便于包埋时定位)→无水酒精(两次),每级停留时间2~4小时或更长(无水酒精中时间宜短)。用95%酒精配制各浓度酒精的方法:设原有酒精浓度为A,所需配制酒精浓度为B,则取Bml原有酒精,加上A-Bml蒸馏水,即可获得Aml的B%的究竟。例如:95%酒精配成70%的酒精,则取70ml的95%酒精,加上25ml蒸馏水,则配成了95ml的70%的酒精。(四)透明透明的目的是将脱水剂从材料中除去,使材料透明,增记折光系数;同时便于下步的浸蜡和包埋等程序(因为究竟不能溶解石蜡)。透明剂是一种既能与脱水剂混合,又能与包埋剂混合的药剂。常用的透明剂为二甲苯和***仿,适用原则也是逐级进行,可减少材料收缩。一般步骤是:2/3纯酒精+1/3二甲苯→1/2纯酒精+1/2二甲苯→1/3纯酒精+2/3二甲苯→二甲苯(两次),~2小时或更长些。二甲苯穿透能力强,但又宜使