文档介绍：河北农业大学
硕士学位论文
不同波长光照对母鸡间脑和中脑c-fos基因表达的影响
姓名:张毅
申请学位级别:硕士
专业:基础兽医学
指导教师:胡满
2009-06-15
摘要
本实验分别采用红(660nm)、绿(560nm)、蓝(480nm)三种发光二极管对
60 只 150 日龄白来航蛋鸡进行人工照明,每组 20 只。将母鸡右眼遮光 7 天后接受
20Lux 的光照刺激 ,暗适应 . 经遮光和光照刺激后,用两种方法检测 FOS
蛋白:1)免疫组化方法,灌流固定,取脑制作石蜡切片。通过免疫组化方法检测
由不同波长光照刺激引起 c-fos 基因在间脑和中脑的表达; 2) 蛋白印迹法,对母鸡
进行光照刺激后,直接断头,将鸡头在冰上迅速冷却,然后在低温环境下剥离出鸡
脑。将剥离出来的鸡大脑用锡纸包好,迅速放于-80℃冰箱中冷冻。将冷冻后的
鸡脑捣碎,10000 转/秒离心,提取上清液,测出提取液中的蛋白含量,然后用蛋白
印迹法来验证提取液中是否含有 FOS 蛋白,以此来再次验证 FOS 蛋白在鸡脑中的
存在。本试验还用免疫组化的方法研究了几种神经肽 GnRH、GABA、VIP 和β-END
在不同波长光照刺激下的表达。通过对 FOS 蛋白和几种神经肽的检测,阐明由不同
波长光照刺激引起的 c-fos 基因和神经肽在母鸡间脑和中脑的表达的影响及其内在
联系,由此来探究光照对鸡生殖性能,即对母鸡产蛋量的影响,为进一步了解光照
对鸡产蛋的影响机理打下基础。
结果显示,间脑和中脑内有大量 Fos 样免疫反应阳性神经元,主要见于左侧,
分布于圆核(Rt)、室旁核(PVN)、前背外侧核(DLA)、外侧膝状核腹侧部(GLv)
和缰核(HB)、中央灰质层(SGC)、峡核大细胞部(Imc)和小细胞部(Ipc)、峡
视核(ION)、半月核(SLu)、中脑外侧核背侧部(MLd)、红核(RN)和滑车神经
核(nIV)等核团内,其中 Rt、PVN、SGC、Imc 和 Ipc 内免疫反应阳性样神经元最
多。并且蛋白印迹法(western blot)检测的结果显示,49kD 到 90kD 间有明显特异
条带,即 FOS 蛋白条带,证明在母鸡脑蛋白提取液中有 FOS 蛋白存在。不同波长
光照刺激均能引起母鸡间脑和中脑 c-fos 基因的表达,但影响有差异。绿光组比红
光组表达强,普遍差异显著,蓝光组表达介于两者之间。但在 GLv 核中红光组比蓝
光组表达强。并且不同波长光照刺激均能引起母鸡间脑和中脑内几种神经肽的表
达,但影响有差异。对于 GnRH 和 VIP 来说,绿光比红光表达强,普遍差异显著,
蓝光组表达介于两者之间;对于β-END 和 GABA 来说,红光比绿光表达强,普遍
差异显著,蓝光组表达介于两者之间。
关键词:母鸡;波长;c-fos 基因;免疫组织化学;神经肽
Effect of different wavelength lights on the expression of c-fos gene in hen
diencephalon and mesencephalon
Graduate: Zhang Yi
Supervisor: Prof. Hu Man
Major: Basic Veterinary Science
Abstract.
150 days old White Leghorn hens were exposed to red (660nm, R) , green (560nm,
G) and blue (480nm, B) light from light emitting diode (LED) lamps in this study.
There were 20 hens in each treatment. After wearing a blinder to keep dark for 7 days,
the right eyes received a light stimulation of 20Lux for and kept in dark again for
. Following perfusing with fixative, their brains were removed and were made into
continuous paraffin sections. Using immunohistochemical method, expression of c-fos
gene induced by differ