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棘胸蛙不同发育阶段肌肉差异蛋白的质谱分析光谱实验室熊国勇①引言实验部分繁殖习性与行为早期胚胎发育蝌蚪的变态发育和人工养殖方面都有研究沪。我们利用第卷,第两栖类的变态发育是动物演化史上的一个飞跃,是动物由水生向陆生,从用鳃呼吸向用肺呼吸的重大的转变,这个转变在动物进化史上有着重要的地位。在这个变态发育过程中一定伴随着一些组织器官尤其是执行运动功能的肌肉组织蛋白质的表达差异。通过双向电泳琓—分析不同发育阶段肌肉蛋白质表达水平的差异,并对差异蛋白进行质谱,治黾ㄑ芯浚杂诮徊窖芯坎钜斓鞍字始捌溆肓狡芾嗌し⒂骺的关系具有重要的理论与现实意义。棘胸蛙作为一种珍贵的山区两栖类经济动物,在其栖息地生物因子、性腺发育分离出棘胸蛙蝌蚪和幼蛙肌肉蛋白,找出两组之间差异蛋白质点后,本实验主要对其中鱿灾异蛋白质点狿进行质谱鉴定和分析,并根据质谱数据检索网络数据库搜寻匹配蛋白质基本信息。试剂与仪器三氟乙酸。、胰蛋白酶⒍蛩仗谴、碘乙酰胺、口一羟基肉桂酸鍪约辆醋悦拦鶶公司⒁译美国公司渌戳谐龀9媸约辆7治龃浚中国上海生工公司产品。实验用水为纯水。.饕J跃作者简介:,、生物学教学与研究工作。,摘要利用串联质谱对棘胸蛙的不同发育阶段个显著差异的肌肉蛋白质进行分析,根据质谱数据搜索蛋白数据库成功获得蛋白信息。构建了适应于质谱鉴定的棘胸蛙肌肉蛋白样处理方法,为进一步深入研究影响棘胸蛙发育的蛋白质奠定了基础。关键词棘胸蛙;蛋白质组;串联质谱中图分类号:文献标识码:文章编号:——·琋鹘逃г豪硌г耗喜芯G鹣懵号①联系人。手机:;猰甤收穗日期:——邮苋掌冢
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纯水煸热芙猓/煸热芙猓/:/比终浓度隠张ǘ疞克弘煸热芙猓%豂克混匀溶解;%篢纯水隠混匀溶解;腿∫;鹊鞍酌敢海豅混匀溶解。肛Х肿埃冻存。使用时雔酶解缓冲液混合。猅型质谱仪拦鶤公司掷爰赝芗∪獾鞍字誓褐胁钜斓鞍椎恪实验方法沿边缘切取考染凝胶上的差异蛋白质点,置于管。克逑吹鞍字实次,巍焉/两次,至蛋白质点无色透明;%阉;ヒ译嫱阉;ヒ译嫱阉真空冷冻干燥。含疞/庖酰胺/。椅隆荡ν榛;弘逑两次,每次;脱水入婵绽涠隠胰蛋白酶与附饣撼逡夯旌希扛龅鞍字实慵尤隠上述混合液。冰上放置加入肛哺且海‘附。胄拿附釫埽∩;酱屋腿。好看渭尤鶯萃取液至管,‘腿吸取两次的萃取液至上述管;婵绽涠掣稍镌至剩余液体隠,得到肽混合物样品。.芤号渲/疞张ǘ%.〉..焉。与%乙腈体积比混合.￡焉水洗/.乖胪榛/,还原;/干燥。.。.弘
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结果与讨论鋈中,所得溶液全部点到不锈钢邪迳希⒃谑椅孪伦匀桓稍铩势追治利用美国镜腁势滓墙兄势追治觥2问柚茫篣ǔの馗此俾饰,加速电压为,最优质量分辨率为,扫描质量范围为。胰酶消化了的肌红蛋白作为内标校正质谱仪。所有实验样品的质谱图均以用默认模式获所得质谱结果用行数据库检索。搜索参数设置:#菁焖鞯姆绞轿猚篗/;最大允许漏切位点为幻肝R鹊鞍酌浮V柿课蟛罘段柚茫篜,/;在数据库检索时胰酶自降解峰和污染物质的峰都手工剔除。差异蛋白质的质谱检样图谱质谱鉴定的这龅鞍字实憔虺隽肆己玫囊患吨势追澹贸隽穗闹柿恐肝仆,同时果为阳性。以下为鉴定出的龅鞍字