文档介绍：麦照一生愕㏎┮.——生愕!.一——生塑医堂王猩坚堂——————一数援苄苈宜芩躄——一基于功能化纳米颗粒的线粒体识别及细胞荧光成像研究湖南大学硕士学位论文】堂僮由遣厶娃名;昱咂娃刍壁驱箍;墙羞篁僮些签;诠窒握童簦避耋虽金圭廑;馡●觥觯狪●駆●学校代号:级:衄瞳瞳童刍生物医堂王程旦期;诠塞筌避旦期;隆金堡熬攫学号:密甀●鰈
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要摘近年来,荧光纳米材料优良的荧光性质使其在细胞及亚细胞层面的生物标记研究中得到了广泛的关注,为生物分析及生物医学领域的研究提供了新的技术手段和方法。本研究小组利用二氧化硅荧光纳米颗粒开展了一系列生物标记研究工作,但二氧化硅纳米颗粒在亚细胞标记中的研究还未有报道,本论文在实验室已有工作基础上,开展了二氧化硅荧光纳米颗粒用于线粒体标记的相关研究,研究发现纳米颗粒粒径较大会影响亚细胞运输的进行,因此选择小粒径荧光材料金纳米簇作为研究对象,考察其作为细胞荧光标记物的可行性。本论文主要从以下三个方面开展工作:藕烹墓δ芑趸枘擅卓帕5睦胩逑吡L灏邢蜃饔醚芯以砝歹Q前坊交异氰酸酯..,=涣<粒吡L逍藕烹姆肿庸布坌奘蔚蕉趸栌ü饽擅卓帕1砻构建线粒体信号肽功能化二氧化硅荧光纳米颗粒。采用荧光分光光度计、电位仪以及透射电子显微镜对修饰前后的二氧化硅纳米颗粒进行表征。在此基础上以分离纯化的细胞核作为对照,采用流式细胞术考察了信号肽功能化二氧化硅荧光纳米颗粒与分离纯化的线粒体间的相互作用。结果表明:信号肽成功修饰在二氧化硅纳米颗粒表面,并且纳米颗粒粒径在信号肽分子修饰前后没有发生明显变化;同时,线粒体信号肽修饰到二氧化硅纳米颗粒表面后依然保持良好的生物活性,能够介导二氧化硅纳米颗粒特异性识别及结合分离纯化的线粒体,从而为线粒体监测以及线粒体功能调控研究提供了新的思路。藕烹墓δ芑趸枘擅卓帕5幕钕赴吡L灏邢蜓芯在上一章研究工作基础上,以细胞为研究对象,考察了线粒体信号肽功能化二氧化硅荧光纳米颗粒在活细胞内的线粒体靶向情况。将信号肽功能化二氧化硅荧光纳米颗粒和细胞共同培育,并利用韵赴谌苊柑寮跋吡L褰腥旧ǎüす夤簿劢瓜晕⒕刀阅擅卓帕在细胞内的分布情况进行分析。结果表明:功能化二氧化硅荧光纳米颗粒能够通过细胞内吞作用进入细胞,但是未能实现线粒体靶向而是滞留于溶酶体。氯喹处理能够破坏溶酶体膜的完整性,但在氯喹处理后二氧化硅荧光纳米颗粒并未进入细胞质而是粘附于溶酶体膜上,仍滞留于溶酶体中。本章工作为纳米颗粒用于亚细胞标记提供了具有参考价值的信息,荧光纳米颗粒在亚细胞标记领域的进一步应用有赖于发展分散性好、粒径小、非特异吸附小的纳米材料。QG灏椎鞍捉榈己铣傻慕鹉擅状赜糜谙赴ü獬上裱芯在上一章研究工作中发现纳米颗粒粒径较大不利于亚细胞运输的进行,发展基于功能化纳米颗粒的线粒体识别及细胞荧光成像研究蚆Ⅱ
小粒径荧光物质对实现亚细胞标记十分必要。近年来金纳米簇因其荧光特性得到很大改善且具有粒径小、无毒性等优点而成为纳米材料领域科学家们关注的热点并在荧光标记研究中得到了一定应用。本章以牛血清白蛋白介导合成了金纳米簇,并利用荧光分光光度计,纳米粒度及电位仪和非变性聚丙烯酰胺蛋白质电泳进行了表征;在此基础上进一步考察了金纳米簇与细胞间的相互作用,同时将其与生物素相交联考察其用作荧光标记物的可行性。结果表明:牛血清白蛋白介导合成的金纳米簇荧光信号较强且在不同值溶液中荧光稳定性好;与细胞共同孵育时可以通过内吞作用进入活细胞内,在优化培育时间和金纳米簇浓度的条件下可实现较好的活细胞荧光标记效果,并且在经过细胞固定化处理后仍可保持其标记形态;此外生物素化的金纳米簇可以识别及标记链霉亲和素包被的微珠。以上研究对于金纳米簇作为一种新型荧光标记物在活细胞荧光成像领域中的进一步应用具有一定的指导意义。关键词:线粒体,二氧化硅荧光纳米颗粒,金纳米簇,细胞,亚细胞硕士学位论文Ⅱ