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吲哚基二聚体菁类探针同步荧光测定蛋白质的研究林旭聪,燕瑾,郭良洽,谢增鸿’言1引第卷,第:./甶mL500mL-1闕1光谱学与光谱分析I立了一种灵敏的蛋白质同步荧光分析体系。实验考察了吲哚探针的荧光特征、吲哚探针浓度、缓冲体系、IBSA的线性响应范围卅~ǎ觳庀冢疜×gmLBSABSA986103o,相对标准偏差oA19I紫外标准测定法比较,测定偏差为%~。关键词同步荧光;吲哚二聚体菁类探针;蛋白质测定06573A蛋白质定量测定在生命科学、医学和化学研究中具有十[1[3][H][83[具有灵敏度高、选择性好、谱带简化等优点,能够有效地减小体系杂散射光的不良影响,已广泛应用于多组分的同时测定以及生物分子定量测定分析¨,应用前景广阔。目前,在蛋白质分析方面,采用同步荧光分析法的报道较少,发展潜力良好。在荧光分析法中,由于蛋白内源荧光弱,高灵敏荧光探针的筛选也是影响蛋白质分析的关键因素。吲哚花菁探针是近年来研究发展的新型生物荧光染料【‘。由于吲哚基团具有刚性平面结构,荧光性能良好,同时可以作为结合生物大[15,16]发展迅速,并已在核酸等生物分子分析中得到良好应用⒄骨熬笆止憷ā1疚难芯康槐撬嵋对,,迄今为止有关该探针的研究尚未见报道,对其展开同步荧光分析研究,对建立新的蛋白质测定技术具有良好的意义。I特征光谱性能,考察和离子强度等因素影响,研究该探针与血清蛋白的结合反应,建立了一种简便,灵敏、稳定的新型同步荧光检测蛋白质的分析体系,并用于血清模拟样品的分析测定,结果良好。仪器与试剂Eclipse(VarianUSA)lFAll04N()l型酸度计虾.(BsASanland-chem)100拇⒈敢海褂檬毕∈统膳ǘ任ぷ饕海糜的冰箱中保存;,避光保存;柠檬酸钠一撼逡250),按比例混100,并用精密酸度计校正。试剂均为分析纯,实验用水为二次蒸馏水。实验方法在容量瓶中依次加入L-120,.,—,福州大学化学化工学院,福建福州molL1mol2007-08-082007-1116基金项目:。十五”国家重大专项子课题透=ㄊ】萍贾氐阆钅资助作者简介:林旭聪。年生,福州大学化学系讲师e-******@Izedual*:甧.∞×
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·2蛋白壕针作用体系的同步荧光增强度明显降低。实验表明,择位移值作为同步扫描猷,如图接ü庠光谱学与光谱分析第卷芤海盟∈椭量潭龋仓minAI----JJo光谱特征分析548nIn哚探针挠ü夥⑸洳ǔのnlnstokes14。选τ凶畲笥ü馇慷龋尤胧柿康腂,体系同步荧光强BSA波长也随之发生红移。当小于时,血清蛋白分子带正电荷,吲哚探针卸喔龃旱绾傻幕撬峄牛胚崽秸隝可以通过正负电荷吸引接触蛋白分子,并结合在蛋白质分子上,使得探针I剂分子作用产生的非辐射去活化现象会得到有效抑制,荧光1BsA渐转为折迭态,旷螺旋结构紧密程度增加们,嵌入结合在蛋白分子内部的探针自由扭动受阻而不易变型,吲哚平面结构基团与其他双键形成的共轭体系更为稳定,在激发光激发下荧光能量传递效率增大,且探针外界微环境非极性进一步增强,非辐射去活化降低,体系同步荧光强度逐渐增大条件优化pH150250BSApH2pH保珺与吲哚探针作用体系的