文档介绍：蔗糖酶米氏常数的测定[S]1/2VMAXvVMAXKm底物浓度与反应速度关系曲线Vmax•[S]V=Km+[S]还原糖与3,5-二硝基水杨酸(DNS)试剂反应:【仪器与试剂】:分光光度计、恒温水浴、试管、吸管、秒表、(1mg/mL)3%蔗糖溶液()(),5-二硝基水杨酸试剂【操作步骤】(mL)(mL),5-二硝基水杨酸试剂(mL),在沸水浴中加热5min,取出后立即用冷水冷却至室温,以蒸馏水稀释至25mL,摇匀。测540nm处A值。以葡萄糖含量(mg)为横坐标,A值为纵坐标作出标准曲线。取试管8支编号,按下表将蔗糖溶液,醋酸缓冲液分别加入试管,于37℃水浴中保温10min。一定量酶液同一水浴中保温约10min。于各管中依次按同样间隔(),计时,立即摇匀,在37℃中准确温浴5min。按同样次序和时间间隔,,摇匀,终止反应。,,5-,放入沸水浴中加热5min,冷却后稀释至25mL,摇匀,在540nm比色测定A值。以A值对应的葡萄糖量为相对反应速度,以1/[S]为横坐标,1/v为纵坐标作图,由图求出Km值。