文档介绍：硕士学位论文

题目 SIRT1 通过 LXR 及 NF-κB 信号通路抑制泡沫细胞的形成
SIRT1 prevents atherosclerosis through both liver-X-receptor
英文题目(LXR) and NF-κB signalings

姓名曾海涛学号 11020079
所在学院医学院导师姓名王伟教授
专业内科学
入学日期 2010 年 9 月答辩日期 2013 年 6 月
学位论文原创性声明

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作者签名: 日期: 年月日

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日期: 年月日日期: 年月日
汕头大学医学院硕士学位论文
中文摘要

目的:建立 U937 泡沫细胞模型,对比观察能量限制(CR)和高脂加氧化型低密度脂蛋白
诱导对人单核细胞内脂肪积累和 SIRT1 基因表达的影响;探讨 SIRT1 信号通路是否参与泡
沫细胞形成的调节机制及是否通过调节 LXR 和 NF-κB 抑制泡沫细胞的形成。

方法:用含有不同浓度软脂酸钠的培养基培养单核细胞,并利用四氮唑蓝检测法(3-(4,
5-dimetrylthiazol-2-yl)-2, 5-diphenyltetrazolium bromide, MTT)确定一个对于细胞损伤较小
且效果最好的药物作用浓度。分别利用低糖(能量限制组、CR 组)、高糖(对照组)、高
脂(软脂酸钠组)、高脂加氧化型低密度脂蛋白(oxLDL)不同培养基培养单核细胞,油红
O 对细胞进行脂肪染色,定性定量检测细胞内脂肪积累情况。然后在同样模型的基础上,
分别提取细胞内 mRNA 和蛋白质,进行逆转录 PCR 和 Western blot 检测,观察不同组间
SIRT1、LXR 和 NF-κB 基因和蛋白的表达情况。最后在高脂加低密度脂蛋白模型中加入
SIRT1 激动剂 SRT1720 及 SIRT1 抑制剂尼克酰胺,在基因和蛋白水平观察 LXR 及其下游
靶分子 ABCA1, ABCG1, CCR7 和 NF-κB 及其下游靶分子 TNFα, IL-1β的表达情况。

结果:MTT 的检测结果显示, 的软脂酸钠是一个合适的药物作用浓度。观察细胞
内脂肪积累的试验结果显示,高糖诱导所产生的细胞内脂肪积累没有显著性变化,CR 组
的细胞内脂肪积累显著少于其他三组,高脂诱导下的细胞内脂肪积累显著高于其他三组。
RT-PCR 和 Western blot 的试验检测结果表明,与高糖培养和高脂培养情况下不同的是,CR
情况下,SIRT1、LXRa 及其靶分子的表达增加,而 NF-κB 及其靶分子的表达降低。与高
糖培养情况下相比,高脂培养可以促使 SIRT1 及 LXRa 及其靶分子 ABCA1, ABCG1, CCR7
的表达降低,可使 NF-κB 及其靶分子 TNFα, IL-1β的表达增加。在高脂加低密度脂蛋白培
养情况下,SRT1720 作用可以促使 SIRT1、LXRa 及其靶分子 ABCA1, ABCG1, CCR7 的表
达增加,但 NF-κB 及其靶分子 TNFα, IL-1β的表达降低,同时细胞的泡沫化进程被阻止。
SIRT1 的抑制剂尼克酰胺可以抵消 SRT1720 的上述作用。

结论:在高脂尤其是高脂加氧化型低密度脂蛋白培养条件下,人单核细胞内积累了大量的
脂肪,在单核细胞泡沫化的进程中,SIRT1 基因的表达发生了显著变化,LXR 及其下游靶
I
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分子 ABCA1, ABCG1, CCR7 随着 SIRT1 表达的增强而增强,而 NF-κB 及其下游靶分子
TNFα, IL-1β随着 SIRT1 表达的增强而减弱。我们的实验证实了在泡沫细胞的形成过程中
SIRT1 信号被抑制,并且 SIRT1 可能通过激活 LXR-ABCA1/R7 信号通路和抑制
NF-κB 信