文档介绍：盐酸左氧***沙星与牛血清白蛋白的相互作用贾丽华,曾晓丹,郭祥峰()齐齐哈尔大学化学化工学院,齐齐哈尔161006()()摘要:研究了盐酸左氧***沙星OFLX与牛血清白蛋白BSA间的相互作用,证实了二者间的相互作用为单一的静态猝灭过程,求出了结合常数与结合位点,并依据能量转移理论确定了药物与蛋白的最近距离。关键词:盐酸左氧***沙星;牛血清白蛋白;荧光猝灭()中图分类号::A文章编号:1001-7011200705-0692-04左氧***沙星是氧***沙星的左旋光学活性体,活性是氧***沙星的2倍,毒副反应更小,而且工艺改进后可大幅度降低生产成本,其市场份额已超过环丙沙星,居喹诺***类抗菌药之首,在抗感染临床治疗中已成为广[1]泛应用的一线抗菌剂。进入体内的药物要通过血浆贮存与运输才能达到受体部位产生药效作用,而血清[2-6]白蛋白具有可与许多内源和外源性化合物结合的功能。因此考察药物分子与蛋白质的作用对于了解药物的转运和代谢过程,及其与蛋白质的结构与功能的关系以及阐明生物大分子与小分子相互作用的本质都()()具有重要意义。本文对盐酸左氧***沙星OFLX与牛血清白蛋白BSA的相互作用进行了研究,求出了结合常数与结合位点,并依据能量转移理论确定了药物与蛋白的最近距离。1实验部分111仪器与试剂()()F-4500荧光分光光度计日本Hitachi公司;PB-20标准型pH计Sartorius;TU-1901紫外可见分-5-1()()光光度计北京普析公司。BSA北京奥博星生物技术责任有限公司,浓度210×10mol〃L;OFLX-4-1()哈尔滨制造总厂,原药,510×10mol〃L甲醇溶液;pH=713Tris缓冲溶液。甲醇为市售分析纯化学(Ω)试剂,使用前按文献[7]方法精制。实验用水均为超纯水比电阻为1812M。112实验方法11211溶液的配制在5mL容量瓶中依次加入一定量的OFLX溶液、甲醇、1mL缓冲溶液、BSA溶液,用超纯水稀释至5λmL,体系溶剂比为甲醇?水=1?9,摇匀。在荧光分光光度计上,以=280nm激发,记录300,600nm范ex围内的发射光谱,于360nm处测量溶液的荧光光谱。复合体系的荧光光谱是固定BSA的浓度,逐渐加大OFLX的浓度,以280nm为激发波长进行测定。11212药物小分子对BSA荧光猝灭作用机理BSA体系中,随着药物分子浓度增加,BSA在360nm处的荧光发射峰强度逐渐降低,表明药物分子对BSA有猝灭作用。对BSA荧光猝灭过程若为动态猝灭,则其作用过程应遵循Stern-Volmer方程:()1F/F=1+KC0SV式中,F是BSA溶液的荧光发射总量,F是加入药物小分子后BSA溶液的荧光发射总量,C是药物小分子0-1-1()()的总浓度mol〃L。K是Stern-Volmer猝灭常数L〃mol,且K由下式定义:SVSV收稿日期:2006-09-05()基金项目:黑龙江省自然科学基金资助项目B0202,E200530()作者简介:贾丽华1963-,女,教授,博士,主要研究方向:超分子化学,E-mail:jlh29@τ()K2=k×SVq0-1-1()τ式中,k是由扩散控制的双分子动态猝灭速率常数L〃mol〃s,是生物大分子内源性荧光寿命,本q0-8[8]τ文取=10s。011213药物小分子与BSA作用距离的计算对于药物小分子与血清蛋白结合形成络合物,根据偶极-偶极非辐射能量转移理论即Förster理论,可以求出结合位置与蛋白质中发荧光基团之间的距离,距离越小,药物分子越有利于被蛋白质存储与转运,越能发挥其药理作用。当荧光给体与受体分子之间最大距离小于7,10nm,且荧光给体的发射光谱与受体-受体间的距离r的吸收光谱存在相当程度的重叠时,两者之间可能发生能量转移。能量转移效率与给体的关系为:6()()E=1/[1+r/R]30()能量转移的效率E为50%的临界距离R为:06-252-4(Φ)()4R=818×10KnJ0D能量转移效率E可用下式计算:()E=1-F/F502Φ式中,K为供体受体各项随机分布的取向因子,n为介质的折射指数,为给体的荧光量子产率,J表示供D体的发射光谱与受体的吸收光谱二者重叠积分:4()(λ)ε(λ)λΔλ(λ)Δλ6J=F/F??2(λ)ε(λ)λλF为BSA在波长处的荧光强度,是药物分子在波长处的摩尔吸光系数。只要得到E、K和n并通过测定光谱求出积分J,就可以计算得到R与r。011214药物小分子与BSA的表观结合常数K以及结合位点数的计算A[9]对于静态猝灭,荧光强度与猝灭剂的关系可由荧光分子与猝灭剂的结合常数表达式推导求出。设生物大分子B有n个相同且独立的结合点位,则与药物分子间的猝灭反应可表示为:nQ+BQBn平衡常数K为:0n()7K=[QB]/[Q][