文档介绍：318中国药科大学学报JlfChiPhrmcetilUniity198819(4):318一319应用生化转化法由血红素制备胆红素吴梧桐蔡澎李继琦(生物化学教研室)PREPARATIONOFBILIRUBINFROMHEMEBYBIOCHEMICALTRANSFORMATIONWWtgCiPgdLiJih(D叻对阴耐ofBichml’stry)胆红素主要来自猪牛等动物的胆汁具有解热降压促红细胞增生及抗病毒等功能是合***工牛黄所必需的原料目前以人工牛黄作为处方中有效成分的中成药品种不断增加胆红素已日益引起国内外的重视为解决其来源问题我们根据体内血红素转化为胆红素的生化代谢途径设计了一条由血液制备血红素再经生化转化生成胆绿素然后再转化为胆红素的简便制备方法本法从每吨猪血中可获得血红素3kg由血红素转化成胆红素的收率在30%左右产品纯度高于90%成品的熔点及红外光谱紫外光谱薄层层析图谱均与天然胆红素一致本法可使动物血液得以充分利用其生产成本仅为提取法的25%左右具有较高的经济价值一血红素的制备采用由笔者改良的Fischer法由新鲜猪血制得将采集的抗凝新鲜动物血静置沉降弃去上清液得红细胞沉淀物用生理盐水洗涤得红细胞用自来水或低渗溶液处理使其破裂释放出血红蛋白得裂解液用盐酸处理该裂解液使珠蛋白与血红素辅基分离80℃加热约lh冷却后过滤除去不溶物即得血红素溶液加入络合剂使血红素与之络合形成不溶性的复合物静置沉降收集沉淀经重结晶得血红素结晶产品纯度达95%以上由本法制得的血红素收率按原血量计可达3汤二胆红素的制备1由血红素制备胆绿素血红素溶液在适合的反应条件下经催化开环得到胆绿素溶液该溶液用***仿终止反应并抽提3一4次直至上层液绿色基本褪去再用与***仿同体积的水洗3一4次随后即加入按***仿提取液体积2%(W/V)的无水硫酸钠脱水经减压浓缩得到胆绿素粗品经硅胶柱层析得胆绿素纯品2胆绿素还原成胆红素将制得的胆绿素溶于适量的反应溶剂中加适量还原剂还原一定时间即得到胆红素溶液还原反应终止后取上清液转入2倍于反应液的***仿中收集下层液经水洗后再用干燥剂脱水数分钟吸滤取上清液减压浓缩真空干燥即得到胆红素必要时再行重结晶三胆绿素及胆红素的分析鉴定1胆绿素的分析(1)TLC采用300目硅胶以05%调铺玻板点样用******仿(4:96)展开R值为042(2)光谱分析取胆绿素的***仿溶液在350一750m区段作紫外吸收光谱测定在380和662m处分别有明显的吸收峰2胆红素的分析鉴定(l)调铺活化后点样以***仿甲醇水(48:28:6)展开与美国SIGMA公司标准品(下同)对照R值一致(均为09)o(2)光谱分析及含量测定称取同量的自制胆红素和标准品配制成相同浓度的胆红素***仿溶液在350一600m区段作紫外吸收光谱测定两者均在455m处有最大吸收峰同时计算得自制品的含量达94%(3)熔点测定自制胆红素与标准品胆红素的二甲酷熔点分别为197一200198一200C二者基本8年月日收稿4期吴梧桐等应用生化转化法由血红素制备胆红素319一致(4)红外光谱取标准品胆红素及自制胆红素分别用层析纯澳化钾研匀压片(终浓度分别为2汤和3筋)作红外扫描分析特征区和指纹区的吸收峰两者完全一致四讨论1改良的Fischr’法采用了络合剂络合血红素形成不溶性的复合物后再用有机溶剂进行结晶减少了有机溶剂的用量2在动物体内胆红素由血