文档介绍：生物选修 3知识点专题1 基因工程基因工程的概念基因工程是指按照人们的愿望,进行严格的设计,通过 体外DNA重组和转基因技术, 赋予生物以新的遗传特性,创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品 。基因工程是在 DNA分子水平上进行设计和施工的,又叫做 DNA重组技术。(一)基因工程的基本工具“分子手术刀”——限制性核酸内切酶(限制酶)(1)来源:主要是从原核生物中分离纯化出来的。(2)功能:能够识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列,并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间磷酸二酯键断开,因此具有专一性。(3)结果:经限制酶切割产生的 DNA片段末端通常有两种形式: 黏性末端和平末端。“分子缝合针”——DNA连接酶两种DNA连接酶(E·coliDNA连接酶和T4-DNA连接酶)的比较:①相同点:都缝合磷酸二酯键。②区别:E·coliDNA连接酶来源于T4噬菌体,只能将双链DNA片段互补的黏性末端之间的磷酸二酯键连接起来;而T4DNA连接酶能缝合两种末端,但连接平末端的之间的效率较低。与DNA聚合酶作用的异同:DNA聚合酶只能将单个核苷酸加到已有的核苷酸片段的末端,形成磷酸二酯键。DNA连接酶是连接两个DNA片段的末端,形成磷酸二酯键。“分子运输车”——载体(1)载体具备的条件:① 能在受体细胞中复制并稳定保存 。②具有一至多个限制酶切点,供外源 DNA片段插入。③具有标记基因,供重组 DNA的鉴定和选择。2)最常用的载体是质粒,它是一种裸露的、结构简单的、独立于细菌染色体之外,并具有自我复制能力的双链环状DNA分子。(3)其它载体: 噬菌体的衍生物、动植物病毒(二)基因工程的基本操作程序第一步::编码蛋白质的结构基因。,真核基因是人工合成。人工合成目的基因的常用方法有反转录法_和化学合成法_。(1)原理:DNA双链复制(2)过程:第一步:加热至90~95℃DNA解链;第二步:冷却到55~60℃,引物结合到互补 DNA链;第三步:加热至70~75℃,热稳定DNA聚合酶从引物起始互补链的合成 。第二步:基因表达载体的构建目的:使目的基因在受体细胞中稳定存在,并且可以遗传至下一代,使目的基因能够表达和发挥作用。组成:目的基因+启动子+终止子+标记基因(1)启动子:是一段有特殊结构的 DNA片段,位于基因的首端,是RNA聚合酶识别和结合的部位,能驱动基因转录出mRNA,最终获得所需的 蛋白质。(2)终止子:也是一段有特殊结构的 DNA片段 ,位于基因的尾端。-1-(3)标记基因的作用:是为了鉴定受体细胞中 是否含有目的基因 ,从而将含有目的基因的细胞 筛选出来。常用的标记基因是 抗生素基因。第三步:将目的基因导入受体细胞 _转化的概念:是目的基因进入受体细胞内,并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程。常用的转化方法:将目的基因导入植物细胞:采用最多的方法是 农杆菌转化法 ,其次还有 基因枪法和 花粉管通道法等。将目的基因导入动物细胞:最常用的方法是 显微注射技术。此方法的受体细胞多是 受精卵。将目的基因导入微生物细胞:原核生物作为受体细胞的原因是 繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对较少 ,最常用的原核细胞是 大肠杆菌 ,其转化方法是:先用 Ca2+处理细胞,使其成为 感受态